上皮性肿瘤细胞中Ig kappa基因的增强子活性及其轻链表达的调控机制

上皮性肿瘤细胞表达免疫球蛋白（Ig）是近年来国内外多个实验室发现的异常现象，研究表明该肿瘤来源的Ig具有一定的生物学及免疫学功能，且目前报道的肿瘤Ig其轻链均为kappa链。我们的前期工作也已证实多种上皮性肿瘤细胞表达Ig kappa轻链，并发现Ig kappa基因表达的必需因素iEκ和3'Eκ增强子在表达kappa轻链的鼻咽癌细胞中活化。以此为基础，本项目将以iEκ和3'Eκ这两个关键的作用元件作为研究对象，以表达kappa轻链的鼻咽癌细胞为实验模型，重点研究调控iEκ和3'Eκ的活性从而促进kappa轻链表达的关键反应元件和反式作用因子。通过对上皮性肿瘤细胞表达Ig kappa轻链的分子机制进行探索性研究，明确上皮性肿瘤细胞中kappa轻链表达的关键调控分子，为认识肿瘤发生发展过程中这一异常的分子事件及从免疫调控角度防治肿瘤提供新的思路。

免疫球蛋白kappa轻链基因的表达受不同的顺式作用元件及反式作用因子调控，其中起调控作用的关键顺式作用元件包括内含子增强子(iEκ)及3’端增强子(3’Eκ)。Ig kappa轻链的表达及两个增强子的活化通常认为只发生于B淋巴细胞和浆细胞中，在不表达kappa轻链的细胞包括上皮性肿瘤细胞中没有转录活性。近年来，国内外多个实验室均发现多种上皮性肿瘤表达Ig kappa轻链，但调控其表达的分子机制尚不清楚。我们也发现多种上皮性肿瘤包括鼻咽癌表达Ig kappa轻链，并且EB病毒编码的致瘤蛋白LMP1可以上调kappa轻链的mRNA和蛋白质水平。在此基础上，本项目以iEκ和3’Eκ增强子作为研究对象，以表达kappa轻链的鼻咽癌细胞为实验模型，采用分别针对信号通路中不同层面靶分子的特异性阻断策略，通过Western Blot、RT-PCR、Realtime-PCR、报告基因分析、定点突变、电泳迁移率改变分析、染色质免疫沉淀、RNA干扰等主要技术，探讨了iEκ和3’Eκ增强子在上皮来源肿瘤细胞中的活性及调控其活性从而促进kappa轻链表达的分子机制。研究发现iEκ及3’Eκ在表达Ig kappa轻链的鼻咽癌细胞中处于活化状态，EBV编码的LMP1能够上调这两个增强子的转录活性。深入研究表明，LMP1通过促进NF-κB二聚体p52/p65和AP-1二聚体c-Jun/c-Fos的形成与iEκ的NF-κB序列及邻近的AP-1序列结合上调iEκ转录活性进而上调Ig kappa轻链的表达。同时，LMP1可通过激活ERK信号通路促进转录因子Ets-1结合至3’Eκ的PU序列上调3’Eκ转录活性进而上调Ig kappa轻链的表达。本项目所获得的创新性发现为认识肿瘤发生发展过程中非淋巴细胞系的上皮性肿瘤细胞表达免疫球蛋白的这一异常分子事件及从免疫调控角度防治肿瘤提供新的思路。