TRAF6调控LPS-NF-κB-VEGF-C信号通路促结肠癌微淋巴管形成的作用及其机制

Our previous preliminary research has shown that LPS promotes the expression of VEGF-C through the activation of NF-κB/JNK in colon cancer cells, and then promotes lymphangiogenesis in colon cancer. TRAF6 is a key molecule in LPS-TLR4 downstream signaling pathways, but whether TRAF6 involved in LPS- NF-κB-VEGF-C the activation of signaling pathway, and regulated of colon cancer lymph node metastasis and microlymphangiogenesis is far from been fully elucidated. Therefore, we will aim to address whether TRAF6 can regulate LPS-NF-κB-VEGF-C signaling pathway in promoting microlymphangiogenesis in colon cancer through in cells experiments, in animal experiment and clinical colon cancer specimen detection tested. On this basis, we reveal the mechanism the TRAF6 regulates LPS-NF-κB-VEGF-C signaling pathway through three aspects: the MyD88 dependency TRAF6 complex dissociation, the ubiquitination of TRAF6 molecular and the combined action of TRAF6 and RIP1. These research results will provide a new theoretical basis for foundation study and the design of targeted drugs for preventing lymphatic metastasis in colon cancer.

我们前期实验研究证实：LPS作用结肠癌细胞后，通过TLR4激活NF-κB/JNK，增强VEGF-C表达并由此促进结肠癌微淋巴形成。TRAF6是LPS-TLR4信号通路下游关键分子，但目前尚不知是否参与LPS-NF-κB-VEGF-C信号通路的激活，进而调控结肠癌淋巴转移和微淋巴管形成。本项目拟通过细胞实验、动物实验及临床标本检测，探讨TRAF6通过调控LPS-NF-κB-VEGF-C信号通路促结肠癌微淋巴管形成；在此基础上，从MyD88依赖性TRAF6复合体的解离、TRAF6分子的泛素化和TRAF6和RIP1的共同作用这三方面揭示TRAF6介导LPS-NF-κB-VEGF-C信号通路的机制。研究结果将为抗结肠癌淋巴转移基础研究和设计靶向药物提供新的理论依据。

结肠癌具有易转移，预后差，病死率高的特点，探索结肠癌淋巴转移的机制一直是该领域的热点。申请者前期研究发现，LPS作用于结肠癌细胞后，通过TLR4激活NF-κB/JNK增强VEGF-C表达从而促进结肠癌微淋巴形成。TRAF6是LPS-TLR4信号通路下游的关键分子，但目前尚不清楚其是否参与LPS-NF-κB-VEGF-C信号通路的激活继而促进结肠癌淋巴转移和微淋巴管形成。本项目主要研究TRAF6是否通过LPS-NF-κB-VEGF-C信号通路调控结肠癌微淋巴管形成，以及涉及的具体机制，从而为结肠癌淋巴转移的研究与治疗提供理论依据。.本项目通过细胞学证实TRAF6促进结肠癌细胞株的增殖、迁移和侵袭，并且细胞过表达TRAF6促进NF-κB(p65)、pNF-κB(p65)和VEGF-C蛋白的表达，增加淋巴管成环数量，进一步通过LPS刺激结直肠癌细胞发现，TRAF6、NF-κB、pNF-κB和VEGF-C蛋白的表达增加，同时NF-κB转录因子和VEGF-C启动子的活性也增加，并呈现时间和剂量的正相关性；动物实验证明敲低TRAF6可抑制皮下成瘤降低淋巴转移能力；临床结肠癌组织标本显示TRAF6在肿瘤组织高表达，淋巴管的数量在肿瘤组织中增加。由此证明TRAF6是通过LPS-NF-κB-VEGF-C信号通路调控结肠癌微淋巴管形成。进一步研究发现，产生此机制可能是因为LPS是通过TRAF6第124个赖氨酸发生K63位泛素化，从而由NF-κB通路影响VEGF-C的表达，进而影响微淋巴形成和转移。.综上所述：本项目发现TRAF6通过LPS-NF-κB-VEGF-C信号通路调控结肠癌淋巴形成和转移及其具体机制，若抑制TRAF6的表达可以减少肿瘤的淋巴转移，为后续临床应用打下坚实基础。利用本基金资助我们共发表了论文4篇，完成既定计划。