p21WAF1参与MEK信号通路调控DNA甲基化转移酶1的作用及机制研究

有丝分裂原蛋白激酶信号通路（MEK）主要对细胞的增殖、分化和凋亡信号进行传导，与肿瘤发生发展关系密切，激活MEK信号通路可引起细胞过度增殖和DNA甲基化异常。p21WAF1可抑制细胞增殖周期，DNA甲基化酶1（Dnmt1）调控DNA甲基化。本课题拟采用激活或抑制MEK通路的人胃癌细胞株模型，并在此基础上静默（siRNA干扰技术）或高表达（质粒转染）p21WAF1，观察：（1）细胞周期分布和细胞增殖的变化；（2）DNA甲基化转移酶转录水平及蛋白活性变化，（3）p21WAF1对Dnmt1结合蛋白如PCNA、p300的表达影响；（4）应用染色质免疫沉淀技术确定特定基因区域结合的Dnmt1酶活性水平；从而证实p21WAF1负反馈调控Dnmt1参与了MEK信号通路对DNA甲基化的调控过程，并分析p21WAF1调控Dnmt1的机制，为肿瘤的发生发展机制以及治疗提供新的思路。

本课题主要研究了抑癌基因p21WAF1参与了有丝分裂原蛋白激酶信号通路（MEK）主要对细胞的增殖、分化和凋亡信号进行传导，与肿瘤发生发展关系密切，激活MEK信号通路可引起细胞过度增殖和DNA甲基化异常。p21WAF1可抑制细胞增殖周期，DNA甲基化酶1（Dnmt1）调控DNA甲基化。本课题采用激活或抑制MEK通路的人胃癌细胞株模型，并在此基础上静默（siRNA干扰技术）或高表达（质粒转染）p21WAF1，研究发现p21WAF1可抑制细胞周期分布和细胞增殖，并逆转MEK信号通路激活对细胞增殖的影响，观察到MEK信号通路，可促进DNA甲基化转移酶转录水平及蛋白活性，而P21WAF1可降低DNA甲基化酶的转录水平和蛋白表达，进一步采用蛋白免疫p21WAF1对Dnmt1结合蛋白如PCNA、p300的表达影响；染色质免疫沉淀技术确定p21WAF1结合的Dnmt1酶；从而证实p21WAF1负反馈调控Dnmt1参与了MEK信号通路对DNA甲基化的调控过程。基本上按照课题计划进行了相关研究，其中染色质免疫沉淀技术寻找p21WAF1结合Dnmt1酶的特定基因区域实验部分较难，不易出结果，仍需进一步的后续工作探讨，根据实验结果及相关数据，撰写了论文数篇，处于待发表和已发表状态。培养了研究生2名，他们对分子生物学实验技术和科研思路有一定的了解。