人骨形成蛋白基因在小鼠肌肉组织中的表达研究

1、应用大肠杆菌中表达的人骨形成蛋白的N端片段作为免疫原，免疫新西兰白兔，制备了抗人骨形成蛋白抗血清，经免疫转移电泳证实该抗血清有较好的特异性，ABC免疫组化在正常和恶性肿瘤骨石腊切片上检测效价为1：100～1：1000。2、将人BMP2A和3C端成熟肽分别克隆入大肠杆菌表达载体，获得15-20%高表达。表达产物分离纯化后埋植小鼠肌肉组织具有很强的诱骨活性，证实了BMP cDNA诱骨活性的最小肽段。3、将人BMP1，2A，3 cDNA有诱骨活性的片段分别克隆入真核表达载体BMG中，构建了重组BMPs，经酶切鉴定为正确的克隆，经氯化铯超速离心得到质量好无RNA污染的重组BMPs。4、将这三种重组人BMPs以不同剂量注射小鼠肌肉组织中，证实了最小诱骨量为60Mg，最早的形态学变化7-10天。