芒果甙激活Keap1-Nrf2/ARE抗氧化通路预防白血病首次打击的分子机制

环境污染等因素增高白血病发病风险。新发现的Keap1-Nrf2/ARE抗氧化通路是预防肿瘤的关键性靶点。氧化代谢在环境毒物诱发白血病机制中占据主要地位。我们的前期工作显示抗氧化剂芒果甙具有抗白血病作用，并激活Keap1-Nrf2/ARE抗氧化通路，因此推理芒果甙可通过此抗氧化机制保护造血干细胞DNA免受损伤。造血干细胞DNA遭受二次打击、基因突变积累，是其向白血病干细胞转化的重要分子机制。芒果甙可能通过激活Keap-Nrf2/ARE抗氧化通路干预此分子机制、预防环境毒物诱发的白血病。本项目将进一步在动物模型中研究芒果甙对苯诱导造血干细胞DNA损伤的保护作用、及其激活Keap1-Nrf2/ARE通路的抗氧化机制；并初次探讨芒果甙预防环境毒物诱导的急性髓细胞白血病首次打击、抑制造血干细胞向白血病干细胞转化的新药作用及其分子机制，为开发有效、安全、经济的白血病预防新药奠定基础。

在本课题的研究过程中，我们成功建立了化疗药物依托泊苷诱导的人脐带血单个核细胞DNA损伤的细胞模型，并通过各种分子生物学技术在该模型中阐明了芒果甙可以通过诱导Nrf2表达增加，激活Keap-Nrf2/ARE抗氧化通路，增强抗氧化酶NQO1的表达，进而减轻化疗药物诱导的人脐带血单个核细胞DNA损伤的分子机制。. 利用1.5Gy的低剂量X线照射建立了放射诱导的BALB/c小鼠骨髓单个核细胞DNA损伤的动物模型，在体内水平证明了芒果甙可以明显减轻放射线诱导的骨髓单个核细胞DNA损伤，并表现出显著的剂量依赖性，即随着芒果甙剂量的增加，保护作用越来越强。. 在HL60细胞系中探索了芒果甙增加Nrf2表达的机制，发现芒果甙可以增加Nrf2的稳定性，延长其降解的半衰期，并首次发现芒果甙是通过减少Nrf2与泛素的结合，达到抑制其降解的作用，从而增强Nrf2的表达，激活Keap-Nrf2/ARE抗氧化通路。. 在HL60细胞中进行了芒果甙影响白血病细胞化疗敏感性的研究，发现芒果甙可以激活Keap1-Nrf2/ARE抗氧化通路，但与新近发现的Nrf2激活剂可以增强肿瘤耐药性不同，芒果甙并不会影响白血病细胞对依托泊苷的药物敏感性，不会降低依托泊苷所致的HL60细胞凋亡，反映出这种新的Nrf2激活剂的独特性，提示其在继发性肿瘤/白血病预防中良好的临床应用前景。. 以慢病毒GV118为载体构建了HL60细胞Nrf2干扰RNA稳定转染细胞系，能够有效抑制Nrf2蛋白的表达。目前由于时间所限，后续工作尚在进行中，下一步将利用Nrf2干扰RNA慢病毒载体转染脐带血单个核细胞以及BALB/c小鼠，并进一步探讨芒果甙对造血干细胞的保护作用以及影响Keap1-Nrf2/ARE抗氧化通路的分子机制。