血小板微粒在SSL5加速动脉硬化病变形成中的作用机制研究

Infectious burden is a new risk factor of arteriosclerosis. We have found that staphylococcus aureus superantigen-like protein-5 (SSL5) could activate platelets by binding to GPVI and GPIbα, and release a lot of platelet microparticles（PMs）. SSL5 also accelerated the formation of arteriosclerosis, but the exact mechanism is unclear. As PMs have both procoagulant and pro-inflammatory activities, the major assumption underlying this research is that SSL5-PMs(platelet microparticles from SSL5-activated platelets) may play a crucial role in the accelerated formation of arteriosclerosis. Using the following methods,such as flow cytometry analysis, ELISA, Western blot and RT-PCR,the monocytes' activation and cytokines expression from monocytes stimulated by SSL5-PMs will be assayed. Using RNA interference, further study will be performed on CD40L/CD40 signal transduction in the interaction between SSL5-PMs and monocytes. Animal experiments will be used for studying the acceleration role and the mechanisms of SSL5-PMs on atherosclerosis in apoE gene knockout mice. The neutralizing antibody of SSL5 (5E3) may prevent the PMs increase in Staphylococcus aureus infection. All studies above should be very important for clarifying the mechanism of SSL5-accelerated atherosclerotic lesions, and provide a novel strategy for the prevention of arteriosclerosis.

"感染负荷"目前被认为是动脉硬化新的危险因素。我们前期研究发现，金黄色葡萄球菌超抗原样蛋白-5(SSL5)可激活血小板，并释放大量的血小板微粒（PMs）；并且SSL5可加速动脉硬化病变的形成，但其机制尚不清楚。由于PMs具有促凝血和促炎症两方面的作用，因此推测SSL5作用下形成的PMs（SSL5-PMs）可能在加速动脉硬化病变形成中发挥重要作用。本项目拟采用流式细胞分析、ELISA、Western blot、RT-PCR等方法，研究SSL5-PMs对人单核细胞活化及细胞因子表达的影响；结合RNA干扰技术，深入研究CD40L/CD40信号通路的调节作用；体内实验研究SSL5-PMs加速apoE基因敲除小鼠动脉硬化的作用机制，以及SSL5中和性抗体对金黄色葡萄球菌感染所致PMs升高的防治效果。旨在阐明SSL5-PMs加速动脉硬化形成的作用和机制，并为动脉硬化病变的防治提供新的策略和依据。

“感染负荷”目前被认为是动脉粥样硬化（AS）新的危险因素和防治靶向。我们前期研究发现，金黄色葡萄球菌（S. aureus）超抗原样蛋白-5(SSL5)可激活血小板，并释放大量的血小板微粒（PMPs）。由于 PMPs 具有促凝血和促炎症两方面的作用，因此我们推测，SSL5激活血小板后产生的PMPs（SSL5-PMPs）可能在加速AS病变形成中发挥重要作用。本研究发现：① SSL5-PMPs可通过其表面的CD40L与单核细胞表面的CD40结合，经CD40-TRAF6-NFκB信号通路，促进单核细胞炎症反应。以上内容已正式发表在血栓研究方面的权威杂志Thrombosis and Haemostasis. 2016;115(3):632-45. (Article, IF 5.255)，并作为重点内容在当期杂志的封面予以强调。② PMPs还可能通过其内容物（如HMGB1）作用于巨噬细胞，释放基质囊泡，参与血管病变和促进血管钙化的形成。这方面的内容已发表在PLoS ONE. 2016;11(5):e0156686. (Article, IF 3.057)。③ 系统评价和Meta分析的结果表明，PMPs在急性冠脉综合征的患者中显著升高，其水平与患者的预后相关，该结果发表在Canadian Journal of Cardiology. 2016;32(11): 1325.e1-1325.e10. (IF 3.112) 。目前SSL5-PMPs对apoE-/-小鼠AS病变形成的影响方面的动物实验已大部分完成，待免疫组化等结果出来后，再进行分析和处理。我们已收集了近两年来我院临床确诊为S. aureus感染的46例患者的血浆标本（为不含血小板的PPP），拟采用流式细胞仪检测其中PMPs的水平，然后与正常对照组进行比较，了解S. aureus感染对PMPs水平的影响。本研究为感染因素在AS中的作用提供了新的实验证据。