基于血液中CXCL1调节中性粒细胞源性阿片肽介导针刺抗炎性痛的外周机制初步研究

Evidences demonstrated the safety and effectiveness of acupuncture for inflammatory pain. Recent studies indicated that periphery opioid peptides in the inflammation site were involved in acupuncture treating inflammatory pain, but the source of these opioid peptides and the mechanism of acupuncture regulating them remains unclear. In previous study, we first found that acupuncture could increase the blood CXCL1 in rats when the inflammatory pain was inhibited, and the blood CXCL1 might mediate the effect of acupuncture on inflammatory pain. Other studies have proved that neutrophils express and release opioid peptides, and CXCL1 could facilitate neutrophils to recruit towards the inflammatory site. So we speculate that acupuncture could increase the blood CXCL1 in rats with inflammatory pain (this has been completed in our previous study), and then CXCL1 activates and recruits opioids containing neutrophils in the blood to the inflammatory site and facilitate them to release opioids, participating in acupuncture for inflammatory pain. On the basis of previous studies, we will further investigate the role and mechanism of blood CXCL1 in acupuncture for inflammatory pain, focusing on the opioids released from neutrophils at local inflammatory site by flow cytometry and radioimmunoassay technology, so as to provide new evidences for peripheral endogenous opioid peptide mechanism of acupuncture treating inflammatory pain.

针刺抗炎性痛安全、有效。目前研究已经发现炎症局部外周阿片肽参与了针刺抗炎性痛，但是关于这些阿片肽的来源及针刺调控机制仍不甚明确。我们前期研究首次发现，针刺可显著升高炎性痛大鼠血液中趋化因子CXCL1含量，并且其可能介导了针刺抗炎性痛效应。而已有研究已经证实，中性粒细胞是外周免疫细胞源性阿片肽的主要来源之一；CXCL1可促使中性粒细胞向炎症局部募集。综上我们推测：针刺可能通过升高炎性痛大鼠血液中CXCL1含量（此部分前期工作已完成），作用于血液中含有阿片肽的中性粒细胞使其激活并募集至炎症局部，释放阿片肽，最终发挥针刺抗炎性痛效应。因此本项目将在前期研究工作基础上，进一步明确血液中CXCL1在针刺抗炎性痛中的作用；后以炎症局部中性粒细胞源性阿片肽为切入点，采用流式细胞术、放射免疫等技术，阐明血液中CXCL1介导针刺抗炎性痛的作用机制，从而为针刺抗炎性痛的外周内源性阿片肽机制提供新的科学内涵。

针刺抗炎性痛安全、有效，然其作用机制仍未完全阐明。本项目在前期工作首次发现针刺可显著升高炎性痛大鼠血液中趋化因子CXCL1含量的基础上，提出假说，认为针刺可能通过升高炎性痛大鼠血液中CXCL1含量，作用于血液中含有阿片肽的中性粒细胞使其激活并募集至炎症局部，释放阿片肽，最终发挥针刺抗炎性痛效应。因此本项目首先通过观察调控血液中 CXCL1 浓度或活性对针刺抗炎性痛效应影响，从而明确血液中CXCL1在针刺抗炎性痛中的作用；后以炎症局部中性粒细胞源性阿片肽为切入点，采用流式细胞术、放射免疫等技术，阐明血液中CXCL1介导针刺抗炎性痛的作用机制。结果发现：连续每日静脉中和炎性痛大鼠血液中 CXCL1 活性，可显著翻转针刺抗炎性痛效应。 而一次性中和血液中 CXCL1 活性针刺抗炎性痛效应不受影响。炎性痛大鼠血液中连续静脉注射 CXCL1重组 蛋白可产生类似针刺样抗炎性痛效应。 从而血液中 XCL1直接参与了针刺抗炎性痛。采用非选择性阿片肽受体拮抗剂（纳洛酮） 对炎症局部（足底）阿片肽受体进行拮抗，可显著降低针刺及血液中直接注射 CXCL1 重组蛋白引起的抗炎性痛效应，且说明上述两者的抗炎性痛存在外周阿片肽依懒性。同时采用特异性阿片肽受体拮抗剂发现μ 受体在针灸抗炎性痛中发挥了最重要作用。进一步流式实验发现针刺后炎症局部浸润的白细胞数呈下降趋势，浸润细胞以多中性粒细胞为主，且针刺后炎症局部浸润的中性粒细胞有下降的趋势，而血液中提前中和CXCL1，下降的中性粒细胞有上升的趋势，直接注射CXCL1重组蛋白亦能下调炎症局部中性粒细胞数量。上述结果提示CXCL1介导针刺抗炎性痛与足底浸润的中性粒细胞数量有关。但炎症局部阿片肽是否来源于中性粒细胞尚需进一步验证。本项目明确了血液中CXCL1介导针刺抗炎性痛并初步阐明了其作用机制，为针灸镇痛作用机制提供了新的理论。