组织因子途径抑制物2对小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块的保护作用及机制探讨

组织因子途径抑制物2（TFPI-2）属丝氨酸蛋白酶抑制物家族成员，生理及病理作用均不明确。我们发现TFPI-2与动脉粥样硬化（AS）斑块的稳定性相关，预实验提示TFPI-2稳定斑块与PI3Kγ磷酸化水平有关。鉴于TFPI-2体外可抑制基质金属蛋白酶（MMPs）活性，且人AS破裂斑块中TFPI-2水平降低,因此我们提出TFPI-2缺乏可能是斑块不稳定的重要因素。本课题拟开展：1.在应用基因转染上调TFPI-2水平的ApoE-/-小鼠及在血管内皮TFPI-2基因条件敲除小鼠中，观察斑块稳定性的变化；2.同时观察TFPI-2上调/下调对斑块MMPs表达、活性及信号通路PI3Kγ、NF-κB、PPAR-γ激活水平的影响；3.采用PI3Kγ特异性激动剂及阻断剂干预上述两种小鼠模型，观察其对斑块稳定性及MMPs的作用。研究结果将确定TFPI-2在AS斑块稳定性中的作用及机制，为AS的防治提供新的靶点。

本课题按基金任务书要求系统研究了TFPI-2对小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块的保护作用及探讨机制。在课题研究中我们采用了3种主要的动物及细胞模型：1. ApoE 基因敲除（ApoE-/-）小鼠。本模型的动脉粥样硬化斑块与人类的病变非常相似，通过高脂饮食后可使其斑块自发性不稳定，在此基础上我们构建TFPI-2质粒、将其转入斑块内，建立斑块局部TFPI-2升高的模型。2. TFPI-2条件基因敲除条件小鼠模型。TFPI-2全基因敲除动物不能存活，课题组通过组织特异性定点重组Cre/LoxP系统、实现C57BL/6J小鼠血管内皮条件性TFPI-2基因敲除，从而获取血管TFPI-2-/+小鼠、实现其在斑块局部表达的下调。我们花了3年多的时间才获得成功。3. U937巨噬细胞源性的泡沫细胞。我们采用氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, ox-LDL)诱导U937巨噬细胞形成泡沫细胞，制备研究常用的AS细胞模型。课题的主要结果为：1.在（ApoE-/-）小鼠模型中观察到TFPI-2表达下降与斑块不稳定指标密切相关；2.应用基因转染上调ApoE-/-小鼠动脉组织TFPI-2水平、可观察到斑块稳定性指标的改善，并对MMPs表达、活性及信号通路PI3Kγ/PKB激活水平的发生影响；3.在条件TFPI-2-/-小鼠模型上观察到斑块稳定性指标的恶化，TFPI-2基因敲除、表达下调对斑块MMPs表达、活性及信号通路的影响在进一步总结中。课题研究证明：TFPI-2缺乏是动脉粥样硬化斑块不稳定的重要因素，为急性冠脉综合征的防治提供了新的靶点。课题调整情况：由于时间及经费限制、采用PI3Kγ特异性激动剂及阻断剂干预两种小鼠模型的工作未能开展，我们另外开展了TFPI-2基因多态性与急性冠脉综合征关联性的临床研究，结果表明TFPI-2基因rs59805398位点C等位基因和rs34489123位点A等位基因与冠心病发病存在关联性，其变异可能是中国人群冠心病发病的危险因子之一。TFPI-2基因SNP在冠心病患者中存在连锁不平衡。课题已毕业博士研究生1名、培养硕士研究生1名及青年研究人员2名。公开发表论文4篇（其中SCI1篇），待发表论文2篇，其他的结果在进一步的整理中。在此基础上，课题组新申请到2012年度青年基金一项81200200.