基于NF-κB／IκB信号通路探讨瑶医神火灸对缺血再灌注大鼠神经保护作用的机制研究

Ischemic stroke with a high morbidity, mortality, morbidity and recurrence rate, is major public health problem of the world. Use traditional Chinese medicine and national medicine treatment of ischemic stroke is a hot research topic in recent years. Yao medicine is the treasure of traditional medicine. Yaoyi-Shenhuojiu in prophase research proved to improve limb spasticity in patients with cerebral apoplexy, promote recovery movement pattern, improve the quality of life have the exact effect, but its mechanism is unclear. The NF-κB signaling pathway is involved in regulating the body inflammation, immune and cell apoptosis of one of the most important signaling pathways. We assume that the Yaoyi-Shenhuojiu may signal by adjusting the NF-κB pathway, restrain brain regions inflammatory reaction, reduce the apoptosis play a nerve protective effect on ischemia-reperfusion injury. We set up cerebral ischemia reperfusion model used by SD rats , using the morphology, molecular biology, TUNEL detection, immunohistochemistry and Western Blot in combination with imaging research infarction area and ischemia half dark area neuronal apoptosis and brain imaging, determine the inflammatory factor and the NF-κB／IκB signaling pathway and predominate the activity expression of the downstream activity expression of protein, discusses the method to improve the nerve function possible mechanism. Giving full play to the advantages of the national medicine and provide experimental basis for the treatment of ischemic stroke.

缺血性脑卒中具有高发病率、死亡率、致残率和复发率，是全球重大公共卫生问题。中医及民族医药治疗缺血性脑卒中是近年来研究热点。瑶医药是传统医药的瑰宝。瑶医神火灸在前期研究中证明对改善脑卒中患者肢体痉挛状态，促进运动模式恢复，提高生活质量具有确切作用，但其作用机制尚不明确。NF-κB信号通路是参与调节体内炎症反应、免疫和细胞凋亡的最重要信号通路之一。我们假设瑶医神火灸可能通过调节NF-κB信号通路，抑制脑区炎性反应，减少细胞凋亡起到对缺血再灌注损伤的神经保护作用。我们用SD大鼠建立脑缺血再灌注模型，利用形态学、分子生物学、TUNEL检测、免疫组化、Western Blot结合影像研究梗死区和缺血半暗带区神经元凋亡情况及脑影像变化规律，确定其对炎性因子及NF-κB／IκB信号通路上、中、下游蛋白活性表达的影响，探讨该法改善神经功能可能的机制。发挥民族医药优势，为该法治疗缺血性脑卒中提供实验依据。

缺血性脑卒中是全球重大公共卫生问题，具有高发病率、死亡率、致残率和复发率的特点。瑶医神火灸在前期研究中，被证实对改善脑卒中患者肢体痉挛状态，促进运动模式恢复，提高生活质量具有确切作用，但其作用机制尚不明确。为探讨瑶医神火灸对缺血再灌注大鼠神经保护的作用，观察瑶医神火灸对氧化应激、炎症、细胞凋亡相关指标的影响，以及探讨瑶医神火灸是否通过介导NF-κB炎症通路起神经保护作用及相关机制研究。本研究通过建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型，用形态学、分子生物学、TUNEL检测、免疫组化、Western Blot等方法。发现神火灸可显著降低MACO大鼠的神经功能缺损评分、鼠脑损伤体积，且经神火灸治疗后，其神经细胞异常相对较轻，核膜完整、染色质均匀一致、细胞器破坏较少，Nissl染色结果显示，神火灸组Nissl小体的数量增多，细胞形态较为正常，结构较为完整。此外，神火灸可明显降低MACO大鼠的MDA水平，升高其sSOD活性，降低TNF-α、IL-1、IL-10炎症因子的表达，明显降低Tunel阳性细胞，明显降低对Cox-2阳性细胞的表达、Cox-2、iNOS蛋白含量和Cox-2、iNOS mRNA的表达水平，减少 NF-κB/p65 阳性细胞表达、蛋白表达及脑内NF-κB/p65mRNA表达，降低Bax、caspase-3蛋白表达，提升Bcl-2蛋白表达，降低脑内Bax mRNA、caspase-3mRNA表达，升高及脑内 Bcl-2mRNA表达。这些研究结果表明神火灸改善了脑缺血再灌注大鼠神经功能缺损情况，减轻了对缺血脑组织形态和病理学改变，对缺血再灌注大鼠具有神经保护的作用，并且神火灸对脑缺血再灌注大鼠损伤的神经保护作用与抗炎、抗氧化、抗凋亡的机制可能相关，此外神火灸对神经保护的作用机制可能是通过抑制NF-κB炎症通路发挥抗炎、抗凋亡的作用。