细胞遗传不稳定形成中的分子机理研究

我们曾证明致突变物处理哺乳类细胞后，其基因表达改变参与非定标突变发生。据此运用DD-PCR技术，用100对锚定及任意引物组合显示并分离到23个致突变物处理后差异表达片段。其中15个片段的相关基因属对MNNG处理的初级反应基因，另8个属次级反应基因。另有10个片段的差异表达仅在翻译阻断剂合并MNNG处理时才出现。反向缝隙印迹杂交分析印证了10个片段在DD-PCR中的改变。序列分析显示这些片段与许多基因有高同源性，包括参与信号传导及复制的基因。改造真核表达载体的抗性使之不干扰用穿梭质粒检测哺乳类细胞非定标突变，用此载体构建了4个差异片段的反义表达质粒。转染细胞后检测非定标突变，发现反义9C片段表达使细胞非定标突变率增高。