基于iTRAQ技术的奥沙利铂神经毒性的差异蛋白鉴定及电针治疗机制研究

Clinical application of oxaliplatin is widely, Oxaliplatin-induced peripheral neurotoxicity( OIPN) have a high incidence. But its pathogenesis and treatment methods at present there is no unified understanding and standard. Our previous study found that traditional Chinese medicine acupuncture treated OIPN has certain clinical curative effect.In order to further study the mechanism of the pathogenesis of electro acupuncture on OIPN, this project established the rats model of OIPN, electro acupuncture treated model rats, based on biological high-throughput iTRAQ and 2D LC MC/MC analysis technology and IPA analysis software, analysed differentially expressed proteins combinated bioinformatics with systems biology methods, Using network analysis method to study the possible mechanism of different proteins in the pathogenesis of OIPN and electroacupuncture treatment of OPIN, to provide new ideas for the prevention and treatment of OIPN.

奥沙利铂(L-0HP)临床应用广泛，L-0HP致周围神经毒性(oxaliplatin-induced peripheral neurotoxicity,OIPN)发生率高，但其发病机制及治疗方法目前还没有统一的认识和标准，我们前期的临床实践研究发现中医电针治疗OIPN有一定的临床疗效，为进一步探讨OIPN的发病及电针治疗OIPN的机制，本项目通过建立OIPN实验大鼠模型，通过对模型大鼠的电针治疗，基于生物高通量iTRAQ及2D LC MC/MC分析技术，运用IPA等分析软件，结合生物信息学及系统生物学方法分析差异表达蛋白预示的生物学意义，运用网络分析法研究差异蛋白在OIPN发病中的作用和电针治疗OPIN的可能机理，为OIPN的防治提供新思路。

奥沙利铂(L-0HP) 为肠癌一线标准化疗方案，临床应用广泛， L-0HP致周围神经毒性(OIPN)发生率高，但其发病机制及治疗方法目前还没有统一的认识和标准，我们前期的临床实践研究发现电针治疗OIPN有效，本项目基于iTRAQ蛋白组学技术鉴定差异蛋白表达谱，并进行验证，探讨OIPN的发病及电针治疗OIPN的可能机制，寻找潜在的有效药物。 .结果1：成功建立OIPN SD大鼠模型，运用iTRAQ及2D LC MC/MC分析技术，鉴定出3996个蛋白，应用GO、KEGG通路等数据库分析74个明显差异的蛋白质，并确定其生物学过程、分子功能和细胞成分。并成功对部分差异蛋白如氧化应激及代谢、炎症及神经修复相关mRNA和蛋白CXCL4 、HPX、GPX3 、PRKAR2B、 ITGB8、PPP1R3D、EPX进行了验证，本部分研究国内外首次建立了奥沙利铂诱导大鼠OIPN的差异蛋白表达谱，这将为OIPN的诊断、防治开发出新的可能靶标。.结果2：根据蛋白组学所提示的差异表达蛋白，我们对电针治疗大鼠OIPN的分子机制进行了研究，结果显示L-OHP造模后大鼠冷痛阈值明显降低、热痛阈值无明显变化，而电针可增加OIPN SD大鼠冷痛阈值；L-OHP造模可见坐骨神经、尾神经神经光镜下脱髓鞘及炎性改变，呈空泡状，电镜下可见线粒体、细胞器明显减少，而电针治疗可改善上述神经组织的病理改变。进一步研究显示L-OHP能显著下调大鼠坐骨神经中GRα、BCL-2和细胞质中NF-κBp65的表达，上调Bax、细胞核中NF-κBp65的表达，而电针治疗可逆转L-OHP对上述基因和的蛋白的表达。提示电针可通过GRα-NF-κB炎症信号通路及调节BCL-2、Bax表达治疗OIPN。.结果3：针对GRα-NF-κB炎症信号通路可能介导OIPN的病理过程，我们应用中药淫羊藿的主要有效成分淫羊藿苷（ICA）证实ICA 可以上调GRα表达，通过GRα抑制炎症转录因子NF-κB、Stat3、c-Jun 及炎性细胞因子IL-6、TNF-ɑ的表达，其抗炎作用部分可能由于ICA上调了GRα数量、促进其转核，增加的GRα抑制下游炎性转录因子的转录及竞争性的和其进行蛋白蛋白间的结合，阻断下游炎症信号通路造成炎症细胞因子IL-6、TNF-α的生成减少，而达到抗炎的作用，提示ICA有潜在治疗OIPN的可能性。