自建国人NK细胞株（NKG细胞）高效抗癌的NKp30天然免疫识别与分子机制

永生化的人类NK细胞株为肿瘤免疫治疗展示良好应用前景，是细胞转输治疗技术的国际竞争热点。我们已经建立首株国人NK细胞系（NKG细胞），并在多种人鼠嵌合肿瘤模型中证实NKG细胞在体内外均具有高抗瘤活性，并经流式细胞术观察到NKp30受体可能是NKG细胞发挥作用的主要天然免疫识别受体。本课题拟在已有的研究基础上，深入分析NKG细胞杀伤肿瘤过程中天然免疫识别受体群谱及其信号通路链、杀伤分子/杀伤功能相关分子谱，进一步通过抗体阻断、基因干扰等手段证实NKp30受体在NKG细胞杀瘤过程中的作用及其主要分子机制；同时拟对杀伤过程中效靶细胞间免疫突触的形成及特征等进行深入研究，揭示NKp30受体的识别动力学和微结构特征；还将努力寻找NKp30受体可能识别的新型配体。本研究将为NKG细胞成为肿瘤免疫治疗新产品提供理论依据，同时揭示NKp30分子启动NK细胞天然杀伤功能的重要分子机制。

永生化的人类NK细胞株为肿瘤免疫治疗展示良好应用前景，是细胞转输治疗技术的国际竞争热点。本研究在已有研究的基础上，对首株国人NK细胞系（NKG细胞）的杀伤分子/功能分子谱变化情况、辐照前后细胞因子分泌水平等进行了深入的研究，结果表明NKG细胞具有CD56bright NK细胞亚群的特点，同时也具有活化的NK细胞的特征，表型为CD56+CD16- CD27-CD3-αβTCR-γδTCR-CD4-CD8-CD19-CD161-CD45+，表面表达高水平CD2、CD58、CD11a、CD54、CD11b及CD11c等粘附分子及共刺激分子CD48。尽管CD94/NKG2A、CD158b和CD85j等抑制性受体在NKG细胞表面有表达，但NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D和NKG2C等活化性受体存在高水平表达，趋化因子受体CXCR1、CX3CR1在NKG细胞上不表达，而CXCR4、CCR7却有较高水平的表达。另外，与细胞杀伤毒性相关的TRAIL、CD95L、Granzyme B、perforin和IFN-γ等亦存在表达。在外界因素刺激下，800cGy的γ射线辐照前后的NKG细胞均具有较强的细胞因子分泌能力，对IL-2、IL-12、IL-15、IL-2+IL-12、IL-2+IFN-α及IL-12+IL-15均有较强的反应，可以分泌较高水平的IL-6、IL-10、IFN-γ及TNF-α。同时，我们利用NKG细胞对IL-12刺激的高反应性及明显的剂量-效应关系，建立NKG细胞IFN-γ诱生法测定hIL-12活性的方法。本研究为NKG细胞成为免疫治疗新产品并用于临床肿瘤患者的过继免疫治疗提供了理论依据，并为进一步研究NKp30分子等关键分子启动NK细胞天然杀伤功能的重要分子机制奠定了基础。