慢性心力衰竭中医证型与神经内分泌相关性的代谢组学研究

基于内源性神经激素激活在心脏重构和心力衰竭进展中起着重要作用的病理生理机制，本课题提出"心衰不同证型间存在神经内分泌等内源性物质特异性变化"的假说，以肾素-血管紧张素系统和细胞因子变化为研究切入点，引入代谢组学技术，结合心脏超声学方法，研究冠心病慢性心力衰竭气虚血瘀证和阳虚水停证的神经激素及细胞因子等生化指标、心脏形态学及代谢组学指标的变化特点，探讨中医不同证型间神经激素与心室重构关系，探讨心衰不同证型间特异性代谢物质改变及代谢模式,探讨心衰时代谢、结构与功能三者间的关联性，寻找冠心病心衰两种证型生理生化及内源性物质的差异。本项目通过代谢组学研究，超声等形态学和血生化指标关联研究，相互验证心衰时体内代谢物质和功能的变化规律，探讨中医证的本质，使中医证型所具有的复合性与整体观得以明确的表达，这对于心衰中医辨证的客观化研究及中药疗效的提高具有重要的理论和实践意义。

该课题重在发现缺血性心力衰竭气虚血瘀证和阳虚水停证的特异性的代谢生物标记物，为中医辨证提供客观化依据。课题计划收集130例符合西医及中医心力衰竭入选标准的患者，但考虑到心衰病人常合并糖尿病，且糖尿病病人血糖会影响体内代谢模式，干扰代谢组临床研究，遂举行了课题论证会，会上专家均建议减少样本例数，由原来的130例调整为70例。鉴于课题收集病人难度确实较大，且时间有限，最后共收集36例符合标准的心力衰竭患者，各组分别18例，健康志愿者17例。生物学研究方面:记录符合标准的36例缺血性心力衰竭患者的血常规、肝功能、肾功能等神经内分泌及超声心动图相关指标，比较气虚血瘀证和阳虚水停证两组患者上述指标的差异，对差异指标进一步进行ROC曲线分析，计算ROC曲线下面积，并分析与阳虚水停证的相关性。代谢组学研究方面:基于液相色谱-质谱（LC-MS）的代谢组学检测技术，通过偏最小二乘判别分析（PLS-DA）方法对17例健康志愿者、18例缺血性心力衰竭气虚血瘀证、18例缺血性心力衰竭阳虚水停证患者的血、尿样本进行代谢产物谱分析，寻找证候相关的特异性代谢物质群，并将其与代谢通路相结合，为缺血性心力衰竭中医证候的辨证客观化提供理论依据。经过分析得出以下结论：血浆样本：1.RBC、A/G、CHE、SCREA、cTnT、Myo、Pro-BNP是缺血性心力衰竭阳虚水停证区别于气虚血瘀证的客观物质基础，能为其辨证提供客观化依据；2.缺血性心力衰竭气虚血瘀证、阳虚水停证与正常人相比，均呈现出异常的代谢途径：气虚血瘀证主要与磷脂代谢及氨基酸代谢等有关；阳虚水停证与能量代谢、氨基酸代谢及磷脂代谢有关；阳虚水停证在能量代谢、脂肪酸代谢及磷脂代谢方面不同于气虚血瘀证。尿液样本：1. 健康组与心衰病人呈现出明显的区别, 潜在的生物标志物通过MS/MS实验或标准品的比对进行鉴别，结果发现了12 个潜在的生物标志成分及相关的生物代谢途径；2.气虚血瘀证与阳虚水停证的代谢途径存在一定的差别，主要的代谢途径为精氨酸的代谢，磷脂的代谢和能量的代谢。以LC/MS为技术特点的代谢组学研究方法能够将三者区分，为中医证候的客观诊断提供了新的检测方法。课题组人员根据统计分析所得数据及文献检索共发表5篇论文并完成两部著作。