基于lncRNAZNF674-AS1/JNK通路探讨华盖平喘方调控慢性阻塞性肺疾病痰热阻肺证气道炎症的作用机制

Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is a chronic inflammatory disease of the airways.In the previous study, clinical data showed lung function and cellular immunity advanced in COPD patients after hua gai ping chuan prescription treatment.We also found that JNK appeared to be advanced in COPD rats,and lncRNAZNF674-AS1 reduced in COPD rats. The research will establish COPD heat and phlegm blocking lung syndrome models and prevent this disease by hua gai ping chuan prescription.We designed function acquired experiment (virus overexpression)and function deficiency experiment(shRNA).In animal and cell level,we confirmed hua gai ping chuan prescription can regulate airway inflammation of heat and phlegm blocking lung syndrome in COPD.This study may provide evidence of Chinese medicine compound treating heat and phlegm blocking lung syndrome in COPD,in view of integrative medicine of traditional Chinese medicine.

慢性阻塞性肺疾病是一种慢性气道炎症性疾病。我们前期临床数据显示，COPD患者经华盖平喘方治疗后，肺功能改善，细胞免疫水平提高。前期研究发现，JNK水平在慢性阻塞性肺疾病大鼠中表达上升，并且预测出JNK的上游lncRNAZNF674-AS1，且lncRNAZNF674-AS1水平在慢性阻塞性肺疾病大鼠中表达下调。本研究拟建立COPD痰热阻肺证病证结合模型并用华盖平喘方干预，结合功能获得性（过表达慢病毒）和功能缺失性（敲减慢病毒）实验，在动物和细胞水平，验证华盖平喘方通过lncRNAZNF674-AS1/JNK调控慢性阻塞性肺疾病痰热阻肺证气道炎症。本研究将从中西医病证结合角度，为中药复方治疗COPD痰热阻肺证提供实验依据。

慢性阻塞性肺疾病 (COPD) 是一种累及肺实质和气道的慢性炎症性疾病，目前中国COPD人群达1亿。本研究通过体内及体外实验，证实华盖平喘方通过抑制SIRT/Nrf2通路减轻慢性阻塞性肺疾病气道炎症，以及华盖平喘方的重要成分表儿茶素通过抑制ROS/NLRP3通路减轻气道上皮细胞焦亡，从而抑制气道炎症。本研究建立COPD大鼠模型，通过RT-PCR检测肺组织炎症因子水平，免疫印迹检测肺组织氧化应激蛋白水平，HE染色评估大鼠肺气肿指数及炎症评分，证实华盖平喘汤可改善COPD大鼠的肺气肿程度，减轻气道及血管炎症渗出，同时减轻氧化应激反应，抑制SIRT1、Nrf2的表达，降低JNK蛋白表达水平。选取BEAS-2B细胞，通过免疫印迹、流式细胞学、RT-PCR等方法，证实表儿茶素影响 TRIM25介导的Keap1泛素化降解，从而增强Nrf2的稳定性，降低ROS释放，增强细胞抗氧化能力。阐明表儿茶素通过抑制 NLRP3炎症小体活化减轻Caspase-1表达，进而抑制细胞焦亡，同时减轻炎症因子(NLRP3,GSDMD-N,IL-1β,IL-18)的释放。建立COPD大鼠模型，HE染色观察肺组织病理、炎症浸润及肺气肿指数，免疫印迹法检测氧化应激蛋白表达水平，焦亡蛋白Caspase-1表达水平，以及炎症因子(NLRP3, GSDMD-N,IL-1β,IL-18)表达水平,证实表儿茶素可明显减轻COPD小鼠的肺部炎症渗出，降低肺气肿程度，抑制COPD小鼠体内的氧化应激反应及炎症因子的表达。