CTLA-4 CT60基因多态性与1型糖尿病合并甲状腺自身免疫易感性及其机制研究

我们的前期研究显示CTLA-4 CT60 基因多态性与1型糖尿病合并甲状腺自身免疫易感性相关，但具体作用与机制未明。本研究拟通过双荧光素酶报告基因验证CTLA-4 CT60 SNP功能，然后从临床及细胞两个层面进一步探讨CTLA-4 CT60基因多态性能否通过调节sCTLA-4参与1型糖尿病合并甲状腺自身免疫病的发生及可能机制(CTLA-4 CT60易感基因 - - 促进sCTLA-4表达，升高血清sCTLA-4水平 - - sCTLA-4竞争性干扰CTLA-4和B7分子的相互作用- - T细胞增殖活化- - Th1/Th2 细胞偏移-促进1型糖尿病合并甲状腺自身免疫发病)。本项目的实施有利于揭示CTLA-4 CT60 基因多态性在疾病发生中的病理生理意义及分子机制，这可为1型糖尿病合并甲状腺自身免疫的发病提供遗传学证据，并为疾病的防治提供新思路。

本研究从临床及细胞两个层面探讨CTLA-4 CT60基因多态性与sCTLA-4在1型糖尿病（T1DM)合并甲状腺自身免疫发病中的机制。结果：1.成功构建了含CTLA-4 CT60不同等位基因的荧光素酶报告基因质粒，发现携带CTLA-4 CT60 G等位的质粒荧光素酶活性显著高于携带CTLA-4 CT60 A等位的质粒。2.对402例T1DM、476例正常人进行CTLA-4 CT60基因多态性检测。发现合并甲状腺自身免疫（TGAb和/或TPOAb）的T1DM患者GG基因型频率高于正常对照（76.6% vs 56.7%, OR=2.503），等位基因G频率高于正常对照（87.9% vs 75.9%，OR= 2.29）。3.同时识别GAD65-M、-C端（GAD65M+C）抗原表位的T1DM患者甲状腺自身抗体阳性率显著高于T1DM患者（68.7% vs 44.6%，P< 0.05）。4.合并甲状腺自身免疫的T1DM患者血清sCTLA-4水平显著高于甲状腺抗体阴性者及正常对照。sCTLA-4阳性患者血清中的sCTLA-4可与免疫细胞表面的配体CD80和CD86结合。在双向混合淋巴细胞反应激活后加入sCTLA-4检测阳性T1DM合并甲状腺自身免疫患者血清可促进混合淋巴细胞反应的增殖。5.发现携带CTLA-4 CT60 GG基因型的T1DM合并甲状腺自身免疫患者其血清sCTLA-4水平及外周血CD4+T细胞 sCTLA-4/flCTLA-4 mRNA比值显著高于携带AA及AG基因型患者。这些研究结果提示1.CTLA-4 CT60 SNP是功能性的SNP，且是T1DM合并甲状腺自身免疫的易感基因。2.GADA同时识别GAD65-M及-C端抗原表位是T1DM患者发生甲状腺自身免疫紊乱的危险因素。3.CTLA-4 CT60基因可通过增加T淋巴细胞内sCTLA-4 mRNA表达，升高血清sCTLA-4水平。增高的sCTLA-4在免疫反应的活化阶段可与CTLA-4竞争性结合B7分子，影响CTLA-4/B7的相互作用，阻断T细胞活化的负调节信号，参与T1DM合并甲状腺自身免疫的发病。这些研究成果从遗易感基因及细胞免疫水平揭示了T1DM合并甲状腺自身免疫的发病机制，为疾病的防治提供了新的思路。该项目按原计划顺利完成，共发表相关论文7篇，其中SCI收录6篇，CSCD收录1篇。