GARP在调节性T细胞介导的角膜移植免疫耐受中的调控机制研究

调节性T细胞(Tregs)是机体产生耐受过程中最关键的细胞，以Tregs为靶点来诱导移植免疫耐受有良好的临床应用前景。Tregs的治疗效果主要依赖于其特异性抑制分子的表达及其功能。既往研究多认为Foxp3在该群细胞的抑制功能中发挥重要作用，但是最新研究表明GARP是介导Tregs抑制功能更为特异的标记物，但与角膜移植免疫耐受的关系尚无报道。本研究通过建立小鼠角膜移植动物模型，比较耐受和排斥个体Tregs的比例及GARP的表达差异，进而进行体外扩增并将GARP+Tregs过继转移至受体小鼠，比较对植片存活时间的影响，明确GARP在角膜移植免疫耐受中的作用，进一步采用TGF-?、Anti-LAP、组蛋白去乙酰化酶抑制剂等调控GARP的表达及稳定性，观察对Tregs抑制功能和角膜移植免疫耐受的影响，获得有效的体内外调控手段，为其在角膜移植免疫排斥反应防治中的应用提供依据。

本课题成功建立了小鼠角膜移植动物模型和排斥反应评分方法，通过比较免疫耐受小鼠和免疫排斥小鼠外周淋巴结内Tregs的比例，发现GARP+CD4+T细胞比例在免疫排斥小鼠体内显著降低，并且与CD4+LAP+T细胞降低的比例相一致。通过免疫磁珠分选外周淋巴结的Tregs细胞，发现TGFβ诱导iTregs表型中GARP和LAP的表达量明显高于nTregs组。将体外扩增的iTregs细胞通过尾静脉注射过继转移到受体小鼠，可以明显延长同种异体角膜移植术后植片的存活率。进一步通过HDACIS抑制剂等手段进行体内调控，可以有效抑制效应性T细胞（Teff）的增殖，上调GARP的表达，而相反利用Anti-LAP阻断剂，则会影响GARP与LAP的结合，降低同种异体角膜移植术后活化的CD4+GARP+ T细胞和CD4+LAP+T细胞的比例，缩短植片的存活时间。因此，本课题研究说明通过调控GARP+CD4+的新型调节T细胞，有望成为干预Treg介导的角膜移植免疫耐受的新方向。