海洋放线菌WBF-16中具有抗肿瘤活性的蒽环糖苷类代谢产物的快速检测与分离

在前期工作中，我们从海洋放线菌假浅霉灰链霉菌新变种WBF-16的代谢产物中发现了一系列的蒽环糖苷类化合物，并分离鉴定出两个具有抗肿瘤活性新化合物。针对海洋微生物代谢方式的独特性和代谢产物的多样性，如何建立快速有效的从WBF-16代谢产物中分离新蒽环糖苷类化合物的方法成为急需解决的问题。本项目借鉴中药化学复杂体系化学成分研究的新方法，应用液质联用在线检测技术、循环制备液相等分离技术及动态抗肿瘤活性追踪的集成技术，快速的从WBF-16代谢产物中分离新的具有抗肿瘤活性的蒽环糖苷类化合物，结合抗肿瘤活性筛选结果初步探讨蒽环糖苷类化合物的构效关系，为抗肿瘤新药的研究提供先导化合物。

在以往的研究中绝大多数蒽环糖苷类抗肿瘤抗生素都是从陆生资源中分离得到的。考虑到海洋微生物代谢方式的独特性和代谢产物的多样性，能否从海洋放线菌中寻找到新的具有特异性靶点的蒽环糖苷类抗肿瘤药物引发了我们极大的研究兴趣。. 本项目借鉴中药化学复杂体系化学成分研究的新方法，应用液质联用在线检测技术、循环制备液相等分离技术及动态抗肿瘤活性追踪的集成技术，快速的从海洋放线菌假浅霉灰链霉菌新变种 WBF-16 代谢产物中分离得到3个新的具有抗肿瘤活性的蒽环糖苷类化合物，SA-1，SA-2和Chromomycin B，以及其它类型化合物共13个化合物，其中3个Chromomycin类化合物抑制人结肠癌HCT116细胞增殖作用明显（Chromomycin A2，Chromomycin A3和Chromomycin B 的IC50值分别为 5 nm，20 nM和 7 nM），并能够显著促进细胞凋亡（Chromomycin类化合物促进HCT116细胞凋亡的现象未见报道）。. 基于此，我们初步开展Chromomycin A2体外抗肿瘤机制研究。通过MTT、流式细胞术、PCR、Western Blot等技术方法，对经Chromomycin A2 作用后HCT116细胞内ROS，P53，Bcl-2，Bax，mPTP，caspase等关键因子和蛋白的表达水平变化进行深入的研究。结果表明 Chromomycin A2能够提高细胞内ROS水平，促进p53转位至线粒体和mPTP开放，并最终通过依赖caspase-9 线粒体途径诱导HCT116细胞凋亡发生。. 综上所述，本课题建立液质联用在线检测技术、循环制备液相等分离技术及动态抗肿瘤活性追踪的集成技术很好的解决了Chromomycin 类化合物分离的难题，另外Chromomycin 类化合物促进肿瘤细胞凋亡作用未见相关报道，通过对Chromomycin A2 促进肿瘤细胞凋亡药理作用机制的新认识，为进一步开发色霉素类抗肿瘤药物提供先导化合物和理论依据。