Orai1通道干预对小鼠实验性变应性鼻炎的影响

Orai1（或CRACM1）是一种钙储调控性Ca2+通道，是非兴奋细胞- - 尤其免疫细胞膜上主要的调控Ca2+内流的通道，它通过导入钙离子流影响细胞的增殖、信号转导、转录因子的激活以及细胞因子的合成和分泌等活动。本研究系（1）通过检测实验动物鼻腔粘膜组织、粘膜相关淋巴组织、免疫器官脾脏内以及与变应性鼻炎密切相关的下呼吸道- - 气管内Orai1通道表达的变化；（2）通过向小鼠鼻腔导入以慢病毒为载体的针对Orai1基因的干扰RNA观察实验动物变应性鼻炎的症状改善情况、实验组和对照组局部粘膜内肥大细胞、嗜酸粒细胞脱颗粒改变和特异性抗体浓度、细胞因子分泌的变化，分析Orai1通道在变应性鼻炎发病机制中的作用，为研发治疗变应性鼻炎的新药物提供实验依据。

免疫细胞中，钙离子内流依赖的离子通道为钙储释放激活钙通道（CRAC通道），Orai1蛋白为CRAC通道的孔蛋白，对CRAC通道的功能有着重要的调控作用。钙储调节性钙内流（SOCE）参与了肥大细胞脱颗粒等速发性免疫反应以及通过钙离子/神经钙蛋白/激活T细胞核因子信号通路调节基因转录、T细胞与B细胞的增殖与分化等迟发性免疫反应，这些免疫反应在变应性鼻炎（AR）的发生发展中起着重要的作用。.本研究拟通过研究Orai1蛋白在AR小鼠气道黏膜组织、黏膜相关淋巴组织与脾脏内表达的变化，以及下调AR小鼠鼻黏膜中Orai1蛋白的表达水平后对其鼻炎症状改善情况、鼻腔局部及全身肥大细胞、嗜酸粒细胞、T细胞、B细胞免疫功能的影响，从而进一步了解CRAC通道在AR发病机制中所发挥的作用，为研发治疗变应性鼻炎的新药物提供实验依据。.本研究通过免疫组化及Western Blotting等方法证实Orai1蛋白可表达于小鼠的鼻黏膜、鼻黏膜相关淋巴组织（NALT）、气管黏膜与脾脏中，在AR小鼠上述组织中，Orai1蛋白的表达水平明显高于正常对照组小鼠。本研究还发现CRAC通道抑制剂2-氨基乙酯二苯基硼酸（2-APB）鼻腔滴入可减轻AR小鼠鼻部症状并减少嗜酸性粒细胞在鼻黏膜的浸润，其鼻腔灌洗液中炎性介质如LTC4，ECP及IL-4的浓度也有降低。本研究还构建了针对ORAI1基因进行RNA干扰的重组慢病毒Lenti-ORAI1，Lenti-ORAI1鼻腔滴入可成功感染小鼠鼻黏膜细胞，Lenti-ORAI1鼻腔干预可有效下调AR小鼠鼻黏膜与脾脏中Orai1表达水平，并减轻其鼻炎症状，下调鼻黏膜中Orai1表达不仅可降低变应性鼻炎小鼠鼻黏膜中肥大细胞、嗜酸性粒细胞、B细胞与Th2细胞中相关炎性介质的转录与释放，也可降低全身如脾脏与血清中上述免疫细胞相关炎性介质的转录与释放。Lenti-ORAI1鼻腔干预对小鼠AR的抑制作用可能与其阻碍了鼻黏膜上皮细胞中IL-33与TSLP蛋白的合成和表达有关。此外，本研究还发现AR患者中鼻黏膜中Orai1蛋白的表达水平也明显高于正常对照组。.综上所述，SOCE的增加可能参与了AR的发病过程，对CRAC通道的阻滞或下调其表达水平可降低SOCE从而在一定程度上抑制AR的发生发展，鼻黏膜上皮细胞上的CRAC通道可能成为治疗变应性鼻炎潜在的作用靶点。