复方芪参提取物抗肝纤维化-肝癌的TGF-beta/Smad信号转导与MAPK通路调控机制

慢性肝脏损伤后炎症导致的肝纤维化继而发展为肝硬化甚至肝癌，是严重危害人类健康和生命的难治性重大疾病。前期研究表明，经配伍组方的复方芪参提取物（CASE）具有明显抗肝纤维化作用并抑制肝癌细胞移行而且无毒副作用，其作用机制可能与TGF-beta/Smad信号通路有关。为此，拟采用组织芯片、免疫吸附沉淀及Western blot、细胞免疫荧光染色及实时RT-PCR等方法，研究CASE对二乙基亚硝胺致大鼠肝纤维化-肝癌动态模型的作用，检测大鼠肝组织中TGF-beta1及受体、Smad蛋白与靶基因的表达；探讨活化HSC及HepG2中经Samd2/3连接区与MAPK通路发生cross talk的分子机制；CASE对Samd2/3磷酸化与转位、Smad7表达、靶基因转录活性和MAPK通路的影响。拟阐明CASE抗肝纤维化-肝癌作用的分子机制及作用靶点，为将该药用于临床治疗肝纤维化-肝癌提供理论依据。

慢性肝炎症-肝纤维化继而发展为肝癌，是严重危害人类的难治性重大疾病。该课题采用组织芯片、免疫组化、免疫吸附沉淀及Western blot、细胞免疫荧光及实时RT-PCR等方法，研究复方芪参提取物（CASE）对二乙基亚硝胺（DEN）致大鼠肝纤维化-肝癌动态模型的作用，检测大鼠肝组织中Smads蛋白与靶基因的表达；探讨活化HSC及HepG2中经Samd2/3连接区与促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路发生cross talk的分子机制；CASE对Samd2/3磷酸化与转位、Smad7表达、靶基因转录和MAPK通路的影响。结果表明： 1. 整体实验：① CASE明显抑制了肝纤维化程度和肝癌结节的发生和减小结节大小。② CASE明显降低DEN升高的血清中转氨酶、透明质酸、γ-谷氨酰转移酶、碱性磷酸酶水平。③ CASE抑制肝组织中DEN升高的α-平滑肌肌动蛋白、癌前标志物谷胱甘肽S-转移酶（GST-P）蛋白表达。④ CASE抑制肝组织中DEN升高的TGF-β1、TβRI、pSmad2C、pSmad2L、pSmad3L、Smad4、PAI-1蛋白表达。但是，CASE却促进相对正常的肝组织区域而不是肝癌组织中的pSmad3C蛋白表达。2. 体外实验：①CASE抑制TGF-β1活化的HSC、HepG2中升高的Smad2、Smad3的磷酸化。②CASE抑制TGF-β1活化的HSC、HepG2中升高的Smad4、PAI-1（蛋白及转录水平），CASE上调Smad7的表达。③ CASE抑制TGF-β1活化的HSC、HepG2中升高的核转运蛋白Imp7/8的表达。 ④ CASE抑制TGF-β1活化的HSC、HepG2中升高的JNK/ERK/p38磷酸化。3. 进一步结果显示，三种MAPK抑制因子抑制TGF-β1活化的HSC、HepG2中Smad2、Smad3磷酸化，使Smad4、PAI-1表达下降、Imp7/8表达下降且入核减少，却促进Smad7表达。结论：CASE明显抑制了肝纤维化-肝癌发生发展，其机制与MAPK调控下的TGF-β/Smad通路密切相关，为将该药用于临床治疗肝纤维化-肝癌提供了理论依据。.该研究达预期目标。有14篇论文摘要参加国内外学术交流，课题负责人受邀在亚太国际药理学会议上做了大会专题报告。目前发表论文6篇，其中SCI论文三篇。培养三名博士三名硕士。