猪雌激素受体基因反义转录物的鉴定及其生物学功能研究

The estrogen receptor (ESR) is a member of the nuclear receptor superfamily of ligandactivated transcription factors. Once ESR combine with specific responsive elements of estrogen genes, the transcriptional factor will regulate the transcription of genes related to estrogen. There is considerable diversity in the products of ESR gene expression for antisense transcripts. And it plays an important role on the posttranscriptional control of ESR gene. In order to gain an overall understanding of the mechanism of posttranscriptional regulation of ESR gene, the pig ESR gene is targeted on the function of antisense transcripts as a major research object. Firstly, we detect the antisense transcripts of ESR gene in different histiocytes in pig by the technology of strand specific RT-PCR and Northern blot. Secondly, functions of antisense transcript of ESR gene is studied in different environmental conditions (natural, overexpression or silence) by the technology of realtime quantitative PCR, transgene and RNAi. Based on the above researches, we will reveal the transcriptional regulation mechanism of antisense transcript of pig ESR gene in signal transduction pathway.

雌激素受体(ESR)为典型的核转录因子，一旦与雌激素结合，就会刺激靶基因转录，进而调节雌激素促进细胞维持正常的生理功能。研究表明，ESR基因转录过程中产生的反义转录物是基因表达多样性的重要表现形式，从而使ESR基因的反义转录物对雌激素的转录调控起到重要作用。因而，本项目选择猪的ESR基因为研究对象，并在前期研究基础上，拟利用链特异性RT-PCR和Northern印迹杂交等分子生物学技术检测猪某些组织细胞中ESR基因的反义链转录情况，以及通过实时定量PCR、转基因和RNAi等技术在分子和细胞模型上研究ESR基因反义链表达在不同条件环境下（天然、过表达、有义链基因的沉默）的生物学功能作用。通过以上研究，以期阐明猪ESR基因反义转录物在其相关信号传导通路中的转录调控作用。

雌激素受体(ESR)为典型的核转录因子，而ESR 基因转录过程中产生的反义转录物是基因表达多样性的重要表现形式，从而使ESR基因的反义转录物对雌激素的转录调控起到重要作用。本项目选择猪的ESR基因为研究对象，并在前期研究基础上，通过对猪全基因组序列和转录组序列进行分析，筛选出猪ESR基因的反义链序列，通过RNA-RACE技术对ESR基因的3′和5′端进行克隆扩增，获得了猪ESR基因的反义链序列；利用RT-PCR 和高通量测序的方法检测了猪不同组织中ESR基因正义链和反义链的表达情况；通过克隆ESR基因的反义链序列，设计ESR基因的干扰载体，构建了4个RNAi 载体，干扰载体对正义链和反义链与对照组的相对表达量为0、0.03、1.04，对ESR基因mRNA的表达抑制到达100%、97.12%；并构建了pDsRed1-N1-288 、pDsRed1-N1-1392两个不同长度的ESR反义链的过表达载体；利用RNAi 载体和过表达载体分别转染PFFpk15细胞和PK15细胞，研究ESR反义链对基因调控的影响，除了RNAi-609干扰载体外，其他3个干扰载体对AKT1、CAV2、IGF1基因的表达均有显著的升高；ESR基因反义链过表达载体对AKT1基因的表达量有了显著的降低作用，CAV2基因的表达量变化差异不显著，pDsRed1-N1-288对IGF1基因的表达均有显著抑制作用，pDsRed1-N1-1392载体对IGF1基因的表达量显著的升高。通过以上研究，表明猪ESR 基因反义转录物在其相关信号传导通路中的转录调控中起着重要的作用。