马宾灵基因(Mabinlin Ⅱ)体外甜味表达及活性结构发生规律研究

马宾灵（Mabinlin Ⅱ）在全球已发现的7种植物甜蛋白中具有最佳耐酸性和热稳定性。 该课题在我们已有研究的基础上，针对马宾灵基因的结构和甜味表达特点，以及基因翻译后蛋白质修饰发生规律，对马宾灵基因进行体外剪切，探讨马宾灵甜蛋白在体外正确折叠发生方式；根据马宾灵已知的甜味位点与二硫键位点，利用基因定点突变对其位点上的氨基酸序列进行一系列的缺失或突变, 研究马宾灵甜蛋白在体外甜味活性结构与热稳定性结构发生规律；对马宾灵基因进行人工修饰，并在不同的表达体系中表达，以期获得在大肠杆菌和酵母菌中正确表达马宾灵甜味蛋白的高效表达和简易纯化的表达体系。

马宾灵（Mabinlin II）在全球已发现的7种植物甜蛋白中具有最佳耐酸性和热稳定性。针对马宾灵基因的结构和甜味表达特点，本研究设计了一系列的重组马宾灵基因的剪切形式，并分别将不同的重组马宾灵基因导入大肠杆菌表达系统、毕赤酵母表达系统和食品级乳酸乳球菌表达系统中，分别研究了重组马宾灵基因在上述系统中的表达情况，并且根据不同需求建立了多个重组马宾灵蛋白的纯化体系，在此基础上进一步对分离纯化的重组马宾灵蛋白进行了生物学鉴定和活性鉴定。根据对不同结构的重组马宾灵蛋白的甜味活性及热稳定性的对比分析，确定马宾灵甜蛋白的B链结构对维持重组马宾灵蛋白的甜味活性有着重要作用，但由于B链在二硫键结构上的缺失导致其在热稳定性上存在一定的缺陷。本研究成功在大肠杆菌表达系统中建立了重组马宾灵蛋白的包涵体形式和可溶性形式的诱导表达与分离纯化体系，在此基础上对经过生物学鉴定的重组马宾灵蛋白的甜味活性和热稳定性进行了探讨。本研究对植物甜蛋白马宾灵的体外重组表达提供了应用基础，也对马宾灵甜蛋白的活性位点和甜味结构研究奠定了理论基础。