基于“肝气郁滞-内质网应激关联”新假说新靶点的老年性痴呆中药干预研究

蛋白质构象病是近年提出的分子医学新概念，为诸多重大疑难疾病的防治展现了全新的思路和令人振奋的前景。老年性痴呆为典型的神经变性蛋白质构象病。本课题根据老年性痴呆中医传统认识及神经变性构象病内质网应激病理生理研究新进展、结合我们多年研究基础，提出了老年性痴呆"肝气郁滞-内质网应激关联"的新假说，并根据该假说运用疏肝解郁的代表方柴胡疏肝散对内质网应激细胞模型、老年性痴呆细胞模型及老年性痴呆与肝郁证病证结合复合模型PERK、GRP78、ATF-6、 CHOP、caspase-12及泛素、蛋白酶体C2亚基等内质网应激及其相关蛋白降解通路关键指标影响，以期为"肝气郁滞-内质网应激关联"假说提供科学实验依据，并从内质网应激角度探讨疏肝解郁的神经元保护效果、作用靶点及其基因分子机理，同时为中医药防治老年性痴呆等重大疑难疾病的研究开辟新领域、拓展新思路，因而具有重要的研究价值和学术意义。

目的：.目的：本项目立足于“肝气郁滞-内质网应激关联”新假说，选择中医疏肝解郁的代表方——柴胡疏肝散进行肝郁AD动物模型和离体细胞（NG108-15细胞）干预，同时以补肝养髓方药为对照，重点观察各中药方对β-淀粉样蛋白诱导老年性痴呆大鼠模型海马组织病理形态、细胞凋亡、GRP78、CHOP 、PERK、Ubiquitin等ERS及UPS关键指标的影响，观察其对AD模型的干预效果、作用靶点及其分子机理，并探讨“肝气郁滞-内质网应激关联”假说的科学基础。.方法：本研究在束缚实验建立的肝郁证模型基础上行海马立体定向注射凝聚态Aβ1-40溶液制备肝郁型AD动物模型；通过双侧海马立体定向注射Aβ25-35联合长期皮下注射D-半乳糖的方法建立Aβ25-35复合损伤AD大鼠模型。Aβ1-40或衣霉素孵育分别建立AD细胞模型以及ERS细胞模型。通过Morris水迷宫实验检测各组大鼠空间探索及定位航行相关指标的变化，以比较不同处理组别间大鼠空间学习记忆能力；分别检测β淀粉样肽（Aβ）、磷酸化tau蛋白以及ERK、GRP78/BiP、CHOP蛋白与基因表达水平；联合荧光染色法以及流式细胞术检测细胞凋亡情况。.结果:正常组、西药组、中药组动物空间学习记忆能力、糖水偏好实验、海马神经元凋亡数、Aβ、磷酸化tau蛋白、PERK、GRP78/BiP、CHOP的表达以及NA、5-HT、DA含量与AD动物模型组相比有明显差异（P ＜0.05 or P ＜0.01）。干预组细胞增殖能力、细胞凋亡与AD及ERS细胞模型组相比较，差异具有统计学意义（P ＜0.05 or P ＜0.01）； GRP78/BiP、GRP94、CHOP以及Ubiquitin等的表达与AD及ERS细胞模型组存在明显差异（P ＜0.05 or P ＜0.01）。提示柴胡疏肝散可拮抗ERS、阻断细胞内质网应激所致凋亡信号通路，有效改善AD大鼠症状及病理学改变。.结论：柴胡疏肝散对肝郁病证结合AD模型动物的学习记忆能力及ERS系统具有显著的改善作用；对Aβ1-40 制备AD细胞模型或衣霉素诱导ERS细胞模型具有明显的保护作用，其机制可能与改善ERS和UPS系统有关。表明通过疏肝解郁能够有效改善AD模型大鼠行为学改变，拮抗内质网应激，为“肝气郁滞-内质网应激关联”假说提供了科学实验依据，本研究结果为阿尔茨海默病的中医药防治提供了