表皮形态发生素EPM与小G蛋白在肝前体细胞分化过程中的作用研究

在肝脏分化发育、形态形成以及损伤后修复再生过程中，肝基质细胞分泌的可溶性细胞因子、细胞外基质构成的微环境以及细胞内的调控因子都发挥了不容忽视的作用。我们之前的研究发现间质膜蛋白复合物Matrigel和间质细胞表面膜蛋白Epimorphin（EPM）均能诱导肝前体细胞WB-F344细胞发生形态变化形成管腔样结构，并证明细胞骨架调节蛋白RhoA在该过程中起着决定性作用。EPM在腺管的发生过程中具有非常重要的调节作用；而RhoA在胚胎干细胞、间充质干细胞等的分化决定中则起了极为重要的"分子开关"作用。因此在之前的工作基础上，我们构建并筛选稳定表达EPM的细胞系，通过与WB-F344细胞共培养的方式进行诱导，验证EPM的诱导分化作用；通过与含有RhoA基因突变体的WB-F344细胞共培养等方式，确立EPM和RhoA的相互作用关系；通过荧光素酶检测等方式，建立并完善EPM和RhoA的可能作用信号通路

在肝脏分化发育、形态形成以及损伤后修复再生过程中，肝基质细胞分泌的可溶性细胞因子、细胞外基质构成的微环境以及细胞内的调控因子都发挥了不容忽视的作用。我们之前的研究发现间质膜蛋白复合物Matrigel和间质细胞表面膜蛋白Epimorphin（EPM）均能诱导肝前体细胞WB-F344细胞发生形态变化形成管腔样结构，并证明细胞骨架调节蛋白RhoA在该过程中起着决定性作用。EPM在腺管的发生过程中具有非常重要的调节作用；而RhoA在胚胎干细胞、间充质干细胞等的分化决定中则起了极为重要的“分子开关”作用。因此在之前的工作基础上，我们通过（1）EPM直接诱导方式和（2）构建并筛选稳定表达EPM的细胞系，并与WB-F344细胞共培养的方式两种方式进行诱导，验证了EPM能够诱导WB-F344细胞形成管腔样结构并且向胆管细胞分化。我们在WB-F344细胞的管腔样结构形成过程中发现小G蛋白RhoA发挥了重要的作用，通过与含有RhoA基因突变体的WB-F344细胞共培养等方式，验证了管腔样结构形成过程中EPM和RhoA的相互作用关系，并通过western blot、抑制剂以及shRNA干涉等方式，明确了FAK和ERK1/2在该过程中的作用，最终建立并完善EPM和RhoA的作用信号通路。我们在EPM诱导的分化过程中，通过荧光素酶报告系统和CHIP分析，确定了EPM和C/EBPβ以及胆管基因GGT Ⅳ之间的相互作用关系，进而明确了EPM诱导WB-F344细胞向胆管细胞分化的作用信号通路。综上所述，形态发生素EPM是一个非常重要的细胞外分子，而EPM在胆管发生过程中的可能作用机制，就是通过EPM→RhoA→FAK→ERK1/2通路来诱导管腔样结构的发生和EPM→C/EBPβ→GGT Ⅳ通路来诱导向胆管细胞的分化。