基于化学成分与酶学的蒙药长松萝解毒作用机制研究

In this project, we will use the Mongolian medicine Usnea longissima as the research object, based on the theory of Mongolian medicine, In combination with the prophase work of team, integratedly use modern natural medicine, pharmacology, instrument analysis research methods, and use modern chromatographic separation, preparation, drug screening method and spectrum analysis, study the chemical components from Mongolian medicine Usnea longissima for treatment of toxicity. Through the research of influences of this medicine to contents of rat hepatic microsome cytochrome p450 and rat cytochrome b5, and to activity of APND and pNPH, we will determine the effective part and effective components to find the pathways and targets of liver detoxification of effective components of Mongolian medicine Usnea longissima; In order to find lead compound of new stronger toxicide, to explor constituent - activity relationship between detoxification efficacy and related active group, and then to clarify the mechanism of action of the detoxification; Through exploring the HPLC conditions of Usnea longissima to complete the multicomponent map representation and pharmacological activity correlation studies. This project will provide theoretical basis for development of health products, at the same time, will lay a good foundation for deep level development of Usnea longissima abundant Resources and Development of products with national characteristics.

本项目以蒙药长松萝为研究对象，依据蒙医药理论，结合课题组的前期工作，综合运用现代天然药物学、药理学、仪器分析研究方法，拟采用现代色谱分离、制备和药物筛选手段和核磁共振等波谱法，对传统蒙药长松萝治疗毒症的化学成分（组）进行研究。通过该药对大鼠肝微粒体细胞色素P450与细胞色素 b5 含量及氨基比林N-脱甲基酶 ( APND ) 、 对硝基苯酚羟化酶( pNPH )等活性的影响，确定其有效部位和有效成分，弄清蒙药长松萝的有效成分对肝脏的解毒功能的作用途径和靶点；探索蒙药长松萝的解毒功效相关活性的组效关系，进而阐明其解毒的作用机制，以此发现新的活性更强的解毒药的先导化合物；通过探索蒙药长松萝的高效液相色谱条件，完成其多成分图谱表征与药理活性相关性研究。为开发健康产品提供理论依据，同时为深层次开发长松萝丰富的资源，发展具有民族特色的产品打下良好的基础。

本项目以阐明蒙药长松萝的有效物质及传统功效的细胞学机制为目的，结合课题组前期工作，综合运用现代天然药物化学提取分离和结构鉴定技术，开展其化学成分的研究，并结合药理学实验与体外细胞孵化实验，阐释该传统药材的保肝解毒作用与毒性作用之间的关系及其机制。结果：从中分离鉴定30多个成分，其中松萝酸的含量较高，其次缩酚类成分（diffractaic acid，barbatic acid，evernic acid）及其衍生物或中间产物，在研究过程中发现与松萝酸接近的苯并呋喃类衍生物以及黄酮苷类化合物，通过大鼠微粒体孵化实验结合液质联用法检测分离得到的化合物的在微粒体内转化代谢产物，从而探索其肝内代谢途径，其中缩酚酸类化合物为在体外肝微粒体代谢中产生了甲基化、羟基化和异构化的代谢产物,而且转化率较高。苯骈呋喃类化合物在体外肝微粒体代谢中产生了甲基化脱氢的代谢产物,而且转化率较高。以急性肝损伤大鼠模型筛选长松萝的乙醇提取的保肝，解毒活性部位，发现正丁醇萃取部位具有保肝解毒活性，其他部位具有一定的毒性作用，酶活性变化规律探索正丁醇萃取部位的作用机制。该部位能明显降低血清ALT/AST/ALB2/ALP2L/TP2/CHE2/TG 含量。提示，长松萝醇提物的正丁醇萃取部位具有明显的保肝解毒作用。该部位明显提高肝组织中的SOD / MDA / GSH / GSH-px /GR /CAT / GSTS /TNF-2 / LDL-C /HDL-C /P450/Pnph/APND/b5酶活性，说明其解毒、保肝作用机理为降低细胞毒性、保护细胞膜的结构和功能，使不受外界的损伤等。该成果为阐释蒙药材长松萝的传统功效的细胞学机理奠定的较好的基础，并为该传统药材的开发利用提供了有力的保障。