人胚胎干细胞来源的Ⅱ型肺泡上皮细胞的免疫原性

本课题采用改良的细菌人工染色体（BAC）技术，建立基因敲入的人胚胎干细胞(Human embryonic stem cells ,hESCs),用以诱导分化及纯化Ⅱ型肺泡上皮细胞（type Ⅱalveolar epithelial cell,ATⅡ）。同时建立全面分析人抗hESC来源移植细胞的一个有效的体内模型-人源化鼠模型，研究人源免疫系统对hESCs来源的ATⅡ的免疫排斥反应，并探索人源免疫系统耐受hESCs来源的ATⅡ新路径。本课题还进一步探讨hESCs来源的ATⅡ在支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia,BPD）肺损伤修复中的作用。此研究为将来发展hESC为基础的肺疾病治疗奠定基础。

在成功构建具有人类免疫系统的小鼠（人源化鼠，humanized mice,Hu-mice)的基础上，我们采用在hESC中的基因敲入技术，构建了一系列经基因修饰而表达免疫抑制因子(CTLA4-Ig, PD-L1, CTLA4-Ig和PD-L1, IL-10)的hESC，以保证其衍生细胞都表达敲入的免疫抑制因子。发现在hESC的衍生细胞中同时表达“CTLA4－Ig和PD－L1” 可以充分地保护其不被受体免疫排斥，而且此免疫抑制为局部性，对整体的免疫系统没有影响，同时表达“CTLA4－Ig和PD－L1”的hESC定名为CP-hESC。而且采用CRISPR/Cas9n 核酸酶靶向修饰技术，完成了CP-hESC的SPC位点基因敲入表达盒“SFC-IRES-puro-PA-Loxp-CAG-Neo-IRES-puro–PA-Loxp”定名为“CP-Puro-hESC”，发现基因敲入效率明显增加，对照组为在hESC的SPC位点基因敲入以上同样含Puro的表达盒，定名为“Puro-hESC”。已分化“CP-Puro-hESC”和对照组“Puro-hESC”为Ⅱ型肺泡上皮细胞（type Ⅱalveolar epithelial cell or type Ⅱpulmocyte, ATⅡ），该细胞表达 FoxA2，Nkx2.1，SFTPB，SFTPC,CC-10 mRNA基因,然后进行该分化ATⅡ的纯度测定。再将分化来源的ATⅡ移植到人源化鼠中，研究人源免疫系统对hESCs 来源的ATⅡ的免疫反应。