HNF1α调控microRNA抑制肝纤维化的机制研究

筛选与肝星状细胞（HSC）增殖活化密切相关的微小RNA（miRNA）及其下游信号通路是肝纤维化发病机制和治疗研究的新领域。前期工作初步发现，肝细胞核因子1α（HNF1α）可抑制HSC活化及肝纤维化发生发展，其机制可能与miR-194相关。本课题首先观察HNF1α过表达在体内外对HSC激活及实验性肝纤维化的防治作用；miRNA芯片和实时PCR鉴定HNF1α抗纤维化过程中miR-194差异表达情况；利用腺病毒载体上调miR-194在HSC中的表达，观察其对HSC增殖活化的抑制作用，并对其下游信号通路进行系统研究；进一步利用siRNA沉默经HNF1α治疗的HSC中miR-194的表达，观察其对HNF1α抗肝纤维化的抑制作用；最后利用腺病毒载体调控肝纤维化动物模型肝脏中miR-194表达，体内研究上述miRNA对肝纤维化进程的抑制作用及其相关分子机制，为肝纤维化基因治疗提供新的靶点和手段。

研究内容和研究目标按照申请书执行。首先成功分离肝脏HSC，利用表达HNF1α表达的腺病毒AdHNF1α感染HSC，证实外源HNF1α表达可抑制HSC增殖活化和生物学特性；利用实时PCR技术证实HSC活化过程伴随miR-194表达下调和JAK/STAT通路激活，而HNF1α抑制HSC活化过程中，miR-194表达上调，JAK/STAT通路受到抑制；成功构建DMN及BDL致肝纤维化大鼠模型，分别经尾静脉注射AdHNF1α或对照病毒，发现HNF1α可抑制肝纤维化进程，该过程中同时伴随着miR-194表达升高和JAK/STAT通路活性降低。成功构建表达miR-194的腺病毒载体Ad-miR-194，并设计合成特异性沉默miR-194的小干扰RNA siRNA-miR-194。将Ad-miR-194感染活化HSC，发现miR-194可抑制 HSC增殖活化及生物学特性，该过程伴随着JAK/STAT通路相关基因及蛋白变化。将siRNA-miR-194加入感染AdHNF1α的HSC中，抑制miR-194表达，JAK/STAT通路活性上调，HNF1α抑制HSC增殖活化的活性减弱。最后，利用腺病毒载体上调miR-194在肝纤维化动物模型中的表达，初步研究表明，miR-194表达可延缓实验性大鼠肝纤维化进程，相关体内研究结果目前仍在总结进行中。标注基金资助的3篇论著已发表于SCI收录期刊，其中1篇发表于Hepatology；体内部分结果有望在国外SCI期刊再发表论文1篇。课题开展过程中改进了miRNA、siRNA技术和腺病毒载体技术在肝纤维化基因治疗中的应用方法和工作程序，完善了消化内科实验室建设。培养1名硕士研究生及1名博士研究生。