斜带石斑鱼芳香化酶P450基因启动子和5'旁侧区序列的克隆与鉴定及其转录调控研究

本项目以性逆转鱼类斜带石斑鱼为实验对象，采用Universal GenomeWalker的方法，克隆其芳香化酶P450A和P450B基因启动子和5'旁侧区序列，并应用报道基因氯霉素乙酰转移酶与芳香化酶基因启动子构建表达质粒，转染GH3细胞，研究芳香化酶基因启动子转录活性。同时，应用DNA足迹法和凝胶阻滞分析法定位顺式作用元件，并对它们进行缺失突变和点突变，研究这些顺式作用元件对芳香化酶基因表达的调控；应用共转染的方法，研究反式调节因子FTZ-F1和Sox蛋白等对芳香化酶基因表达的调控。在顺式作用元件分析鉴定的基础上，应用酵母单杂交系统克隆斜带石斑鱼性逆转过程中调控芳香化酶基因转录的重要反式作用因子，并进行分析和鉴定。斜带石斑鱼是一种重要的海水养殖鱼类，本项目研究成果对于阐明斜带石斑鱼芳香化酶基因表达调控，和性腺分化、发育和逆转的机制有重要意义，对于人工控制斜带石斑鱼性别也有重要指导作用。