肝富集转录因子依赖的HBV微染色体重塑与病毒复制转录

cccDNA在核内以病毒微染色体形式存在，其染色质水平的表观遗传学修饰对病毒复制转录具有重要调控作用。宿主细胞的肝富集转录因子通过与HBV基因组调控元件直接作用而参与病毒的复制转录调控。病毒微染色体是一种抑制状态，转录因子与DNA调控元件相互作用，必然要涉及染色质重塑。目前肝富集转录因子依赖的HBV微染色体重塑及其与病毒复制转录调控的关系尚未见报道。本研究将以cccDNA微染色体为研究对象，采用cccDNA-ChIP等技术系统研究HBV复制转录过程中病毒微染色体重塑方式以及肝富集转录因子与病毒微染色体结合的动态变化，重点探讨肝富集转录因子对HBV微染色体重塑的影响及其在HBV复制转录调控中的作用。期望阐明肝富集转录因子调控HBV复制转录的病毒微染色体重塑机制，从而对探索cccDNA水平的新型抗病毒方法有所提示。

HBV cccDNA微染色体表观遗传学修饰对病毒复制转录具有重要调控作用。既往文献回顾已发现一些HBV cccDNA组蛋白乙酰化修饰调控病毒复制的报道，并且有些研究还提出了肝富集转录因子可以支持HBV在非肝细胞内复制转录。本课题对肝富集转录因子依赖的HBV cccDNA组蛋白染色质重塑和HBV复制转录的关系进行了深入研究。.本课题主要取得了以下研究成果：.1、全长线性单体HBV DNA转染肝癌细胞株HepG2，通过southern、酶联免疫法和特异引物定量PCR鉴定HBV复制中间体的产生及动态变化，结果表明成功建立了体外非载体HBV细胞复制模型。.2、分别建立了肝富集转录因子PPARα、RXRα和HNF4α高表达及缺陷表达的HBV细胞复制模型，定量PCR和酶联免疫法检测HBV复制中间体的产生及动态变化，结果显示肝富集转录因子参与了对HBV复制转录的调控。.3、成功建立了HBV cccDNA染色质免疫沉淀的方法，并以此方法研究了HBV复制转录过程中HBV cccDNA结合的组蛋白H4及乙酰化组蛋白H3/H4的动态变化。结果表明组蛋白的乙酰化修饰和HBV复制转录的水平相一致。.4、对肝富集转录因子PPARα、RXRα和HNF4α与HBV微染色体相互作用的动态学进行了研究。结果显示PPARα、RXRα和HNF4α均直接结合于HBV cccDNA，且结合的动态变化与HBV复制过程中HBV复制中间体形成相一致，表明PPARα/RXRα/HNF4α可能是通过直接结合HBV cccDNA实现对HBV复制转录的调控。.5、对肝富集转录因子对HBV复制转录相关微染色体重塑的调控进行了研究。结果显示肝富集转录因子对H3/H4组蛋白乙酰化修饰的动态变化与其结合HBV cccDNA水平的动态变化及HBV复制过程中HBV复制中间体形成的动态变化是一致的，表明肝富集转录因子可能是通过与HBV cccDNA结合与组蛋白的修饰酶共同影响组蛋白的修饰即HBV 微染色体重塑实现对HBV复制转录的调控。