SENP1介导的去类泛素化作用在淋巴瘤细胞白血病（LMCL）发病机制中的作用研究

淋巴瘤细胞白血病(LMCL)患者化疗缓解率低、复发比例高、中位生存时间短;其中T-LMCL相比B-LMCL预后更差,目前尚缺乏理想的治疗方法。我们前期研究发现:1)LMCL患者病理标本类泛素蛋白酶-1(SENP1)特异性表达于肿瘤细胞中,其中在T-LMCL的表达又远远高于B-LMCL；2)靶向沉默人T淋巴瘤细胞白血病细胞株Jurkat的SENP1表达后,抑癌基因P53转录水平增加,低氧诱导因子1-α(HIF-1α)蛋白稳定性减少;3)其下游参与细胞凋亡与耐药调控的靶基因如Bcl-2、MDR、VEGF及其受体的表达也随之下降。因此,深入研究SENP1介导的SENP1→P53/NF-κB→PI3K-PKB/Akt→细胞抗凋亡以及SENP1→HIF-1α→VEGF/MDR→细胞耐药两条通路在LMCL的发生、发展过程中的作用对了解LMCL的发病机制有重要意义，并可能提供LMCL潜在的治疗靶点。

本研究目的在于研究下调SENP1在人Burkitt淋巴瘤细胞（Daudi 细胞）中的表达对其凋亡的影响及潜在机制。方法：设计出SENP1靶向的shRNA，并合成，再克隆到慢病毒载体中。利用慢病毒包装载体来感染Daudi细胞。未感染过的Daudi细胞组与感染空质粒的Daudi细胞组作为对照组。利用流式分析GFP阳性的细胞，并且用半定量PCR与Western blot的方法来探索其可能的影响。在感染前后用显微镜观察细胞形态。荧光定量PCR和Western blot用以测量凋亡相关分子（caspase-3, 8 and 9）的mRNA与蛋白表达。在使用COCL2处理24小时后，测量HIF-1α的mRNA和蛋白表达。结果：测序结果显示SENP1靶向的shRNA的表达载体是成功构建了的。流式荧光检测、半定量PCR结果显示干扰效率未79.2±0.026%。感染48小时后，Dauldi细胞变得聚缩，边缘不规则，同时出现了凋亡小体。Western blot结果显示caspase-3, 8 and 9的表达随感染时间延长明显提高（P<0.05）。在缺氧处理后，HIF-1α的mRNA转录水平在三个组中无明显改变（P>0.05），但HIF-1α的蛋白表达水平有明显提升（P<0.05）。但是在sh－SENP1-Daudi组的HIF-1α蛋白表达保持不变。结论：SENP1-shRNA 能够有效抑制SENP1在Daudi细胞中的表达。而抑制SENP1能够促进细胞凋亡。这些发现都提示SENP1可作为基因治疗Burkitts淋巴瘤的重要靶点。