miR200和let7介导胰腺癌干细胞去干性化的反向EMT机制研究

胰腺癌肿瘤干细胞(CSC)与胰腺癌的高复发和高转移率密切相关。由miRNA介导的上皮-间质转化(EMT)是肿瘤干细胞干性状态获得和维持的重要机制。前期研究发现胰腺癌细胞干性化过程中miR-200家族和let7家族表达明显下调，其作用的靶基因转化生长因子β2(TGFβ2)，Zeb2蛋白的表达明显上调。本项目拟通过转基因技术上调胰腺癌CSC中miR-200家族和let7家族表达，诱导负向调控TGFβ2，Zeb2蛋白的表达，进而使间质特性因子：波形蛋白、E-钙粘素、N-钙粘素基因的表达下调，EMT发生逆转，胰腺癌CSC去干性化，观察其在体内、外分裂增殖能力、侵袭力、耐药性的变化，运用生物计算学方法，建立多元回归模型，以此来推导miR200-TGFβ2和Let7-Zeb2信号通路在胰腺癌CSC去干性化过程中EMT逆向发展的机制，为研究胰腺癌的复发和转移机制并最终治愈胰腺癌进行有益的探索。

上皮间质转化过程（EMT）在胰腺癌侵袭过程中起重要作用。我们通过研究miR-200和let7家族在胰腺癌干细胞中的表达，探讨miR-200和let7家族在胰腺癌EMT过程中的作用。方法：我们通过流式分选仪从胰腺癌细胞系PANC-1中分选出CD24+CD44+ESA+三阳性的干细胞（PCSCs），通过RT-qPCR检测PCSC和PANC-1中miR-200与let7家族的表达，通过miR-200a mimic转染PCSCs和miR-200a inhibitor、let7f和miR-98 mimics和inhibitors转染PANC-1，检测miR-200a、let7f和miR-98表达与EMT相关性。结果：PCSCs显示EMT表型，其miR-200a的表达显著低于未分选胰腺癌细胞系PANC-1，PANC-1细胞中let7f和miR-98的表达显著低于胰腺细胞HPDE6c7。并且PCSCs呈现EMT相关表型。转染了miR-200a mimic后PCSCs中EMT特征基因的表达发生了改变，N-cadherin、Vimentin和ZEB1 mRNA的表达显著降低而E-cadherin的表达显著增加，PCSCs细胞形态学明显向上皮细胞形态发生转变；PANC-1细胞转染miR-200a inhibitor后 EMT特征基因的表达发生了改变，N-cadherin、Vimentin和ZEB1 mRNA的表达显著升高而E-cadherin的表达显著降低，PANC-1细胞形态学明显向间质细胞形态发生转变。转染let7f和miR-98 mimics后PANC-1中EMT特征基因MMP-11的表达显著降低而E-cadherin的表达显著增加，PANC-1细胞形态学明显向上皮细胞形态发生转变；PANC-1细胞转染let7f和miR-98 inhibitors后 MMP-11的表达显著升高，PANC-1细胞形态学明显向间质细胞形态发生转变。同时，过表达miR-200a显著降低PCSCs的侵袭和迁移能力，而抑制miR-200a表达显著提高了PANC-1的侵袭和迁移能力。过表达let7f和miR-98显著降低了PANC-1的侵袭和迁移能力，而抑制let7f和miR-98表达显著提高了PANC-1的侵袭和迁移能力。 结论： miR-200a，let7f和miR-98介导了胰腺癌反向EMT过程。