环境内分泌干扰物双酚A通过AHR信号通路介导卵巢功能不足的作用及机制研究

The incidence of primary ovary insufficiency (POI) has risen recent years, leading to seriously impaired reproductive health and life of females. As environmental pollution aggravates gradually, more people are focusing their attention on the affection of Endocrine Disrupting Chemicals(EDCs). Bisphenol A (BPA) is a typical high residual- EDCs, which was discovered to cause POI symptoms in animal model. However, it is poorly known whether BPA contributes to the pathogenesis of POI in human, as well as the molecular mechanisms involved. Our previous study indicated that the pollution load level of BPA in urine of POI patients is significantly higher compared to control women. In this project, the mouse model and the primary antral follicle cells will be exploited to explore the influence of aberrant activation of AHR signal pathway in the occurrence of POI induced by BPA exposure. The result of this study will provide scientific basis for the prevention and management of POI in susceptible population of this disease.

卵巢功能不足（Primary Ovarian Insufficiency，POI）的发病率逐年增高，严重影响女性生殖健康及生活质量。近年来随着环境污染的逐渐加重，环境内分泌干扰物（Endocrine Disrupting Chemicals, EDCs）在POI发病中的作用逐渐引起关注。双酚A (Bisphenol A,BPA)是一种在人体中残留率很高的典型EDCs，动物模型研究表明BPA暴露可引起类POI症状。然而，目前国内外尚无BPA暴露与人类患POI风险的相关性研究，且机制不明。我们前期研究发现BPA在POI患者尿液中的污染负荷水平较健康对照人群显著增高，差异有统计学意义。本研究拟以小鼠在体模型及原代培养的窦卵泡细胞为研究模型，探究BPA暴露在POI发病中的作用，并进一步验证AHR信号通路异常激活在BPA介导的POI发病中的作用及作用机制，为POI的临床诊治、预防和控制提供科学依据。

卵巢功能减退（POI）是生育年龄妇女常见的，复杂性，异质性的内分泌疾病。双酚A（BPA)具有弱的雌激素效应，被列为重要的环境内分泌干扰物。既往已有动物实验显示，BPA暴露可引起类似POI症状。POI导致的低雌激素状态及生育力丧失已成为影响女性生殖健康的重大威胁。然而，目前尚无BPA暴露与人类POI患病的相关性研究。BPA暴露对卵巢功能的影响及其分子机制尚不明确。.主要研究内容：①人群横断面研究BPA暴露与POI发病的相关性；②动物实验研究孕期BPA暴露对F1代雌鼠生殖细胞巢裂解的影响及BPA 通过PI3K-AKT信号通路影响卵巢功能的机制初探；③BPA暴露对雌激素合成相关酶的影响及BPA通过P13/Akt信号通路下调BDNF表达影响卵巢功能的机制研究。.结果：①POI病例与对照组之间BPA暴露浓度无显著差异。我们研究人群的暴露浓度下BPA浓度分级与罹患POI的风险无明显相关性。FSH和AMH水平与尿液BPA浓度无明显相关趋势，而LH在校正混杂因素后与尿液BPA水平呈正相关，接近边缘显著。②小鼠宫内BPA暴露，可见小鼠生殖细胞巢分裂障碍，更少的原始卵泡形成。与对照组相比，BPA 2ug/kg-d暴露时于PDN6起体重开始明显增加，20ug/kg-d BPA暴露组自PDN12起体重明显增加，差异有统计学意义。差异表达的基因中筛选出P13K-Akt信号通路。③随着BPA浓度的增加，BPA对KGN细胞的活力的影响呈明显下降趋势，呈现剂量效应关系。100μM BPA暴露可诱导甾体激素合成相关基因表达量差异。BDNF表达在50uM浓度BPA暴露时开始显著下降，芳香化酶的表达同样下降。100uMBPA作用下，BDNF和芳香化酶蛋白表达水平与对照组相比均有明显下降。.结论：尿液中双酚A的浓度与目前在中国女性中观察到的暴露浓度基本一致。 但是，中国妇女双酚A暴露水平相对较低，与POI发病无明显相关性；孕期BPA暴露可影响F1代小鼠生殖细胞巢的裂解，导致原始生殖细胞数减少，影响小鼠代谢功能，导致小鼠体重增加；BPA暴露可能通过影响E2合成关键酶，导致循环雌激素浓度降低，导致BDNF的表达量降低，BDNF通过与NTRK2受体结合，进一步通过P13/AKt信号通路系统，影响卵泡的发育，影响卵巢功能。