理肺方干预慢性阻塞性肺疾病调控中性粒细胞弹性蛋白酶的机制研究

The project was formed based on the consensus that rotease/antiprotease imbalances is the pathological pivot of the COPD.With the important role of neutrophil elastase (NE),the study ,relying on oxidative stress characteristic rat model of COPD, specific to the COPD pathological evolution link of Airway Oxidative Stress-Inflammatory Cascade-Rotease/Antiprotease Imbalances-Lung Tissue Damage ,take the glucocorticoids and Neutrophil elastase inhibitors(NEI) as positive control groups.Multi-method, such as pathology, immunohistochemistry and molecular biology will be used to comprehensively analyze the changes of NE itself and neighborhood /upstream and downstream relation.The research reveals target mechanism that LiFei Prescription adjusting the rotease/antiprotease imbalances(NE is the main) to treat COPD,forms the superiority evidence of LiFei Prescription treating COPD by regulation NE.It explores a new way for TCM to improve the lung tissue damage from NE imbalances in COPD.

项目针对慢性阻塞性肺疾病（COPD）蛋白酶/抗蛋白酶失衡的枢纽病理环节，围绕COPD气道氧化应激-炎症级联反应-蛋白酶/抗蛋白酶失衡-肺损伤的病理演变，依托氧化应激特征性COPD大鼠模型，运用比较研究设计（阳性对照药为糖皮质激素及DMP777），多角度、多方法（组织细胞病理形态学、免疫组织化学、分子生物学等相互结合）全面研究中药理肺方干预COPD调控中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)的作用机理；揭示理肺方治疗COPD调控NE直接影响蛋白酶/抗蛋白酶失衡，同时影响炎症级联反应、相关因子、肺损伤等内在联动的机制；验证NE为内容主体的蛋白酶/抗蛋白酶失衡是COPD重要病理改变；阐明理肺方治疗COPD，调控以NE为内容主体的蛋白酶/抗蛋白酶失衡是有效机制之一；建立理肺方治疗COPD的靶向、靶点依据；客观评价其调控NE治疗COPD的优效性；为中医药防治COPD调控蛋白酶/抗蛋白酶失衡研究提供范式。

本项目通过总结慢性阻塞性肺疾病炎症反应及蛋白酶-抗蛋白酶失衡的研究进展，重点关注炎症反应及蛋白酶/抗蛋白酶失衡环节，开展理肺方干预氧化应激性COPD大鼠对血清及肺组织匀浆炎性因子和中性粒细胞弹性蛋白酶、a1抗胰蛋白酶影响的实验研究。结果：1.肺功能方面，理肺方能够改善氧化应激性COPD大鼠的肺功能指标（FVC、FEF25%、MMF、PEF，FMFT），改善大鼠通气功能，理肺方中剂量组在改善以上指标方面优于理肺方高剂量、理肺方低剂量、地塞米松和DMP777组。2.炎症反应方面，理肺方能够调节COPD大鼠血清和肺组织匀浆中炎性因子（IL-6、IL-8、ET、PAF、GM-CSF、TGF-β1）的水平，理肺方高剂量在改善血清IL-6、IL-8、TGF-β1、GM-CSF水平上优于其他治疗组，理肺方中剂量在改善肺组织匀浆ET、GM-CSF水平上优于其他治疗组。3.对蛋白酶-抗蛋白酶系统的影响方面，理肺方能够降低氧化应激COPD大鼠血清及肺组织匀浆中NE和NE/α1-AT水平，同时升高α1-AT水平；理肺方高剂量在降低肺组织匀浆NE水平上优于对照药物地塞米松和DMP777，在升高肺组织匀浆α1-AT水平上与地塞米松相近；理肺方中剂量在降低血清及肺组织匀浆中NE/α1-AT水平上优于对照药物地塞米松和DMP777。结论：1.理肺方能够改善氧化应激性COPD大鼠的肺功能指标（FVC、FEF25%、MMF、PEF，FMFT），改善大鼠通气功能障碍。2.理肺方各剂量组均能改善COPD大鼠肺组织炎性细胞浸润、肺气肿、粘液高分泌现象；在改善以上症状方面理肺方中、高剂量优于中药低剂量组。地塞米松和理肺方高剂量大鼠肺内弹性蛋白的表达较高，从而证实理肺方可以改善大鼠肺内蛋白酶/抗蛋白酶失衡，抑制肺组织结构蛋白溶解，延缓COPD肺组织损伤。3.理肺方能够通过调节COPD大鼠血清和肺组织匀浆中IL-6、IL-8、ET、PAF、GM-CSF、TGF-β1的水平，来改善大鼠肺部及全身性炎症反应，其中理肺方高剂量在调节血清IL-6、IL-8、TGF-β1、GM-CSF水平方面优于其它各组，理肺方中剂量在改善肺组织匀浆ET、GM-CSF水平上优于其它各组。4.理肺方能够调节氧化应激COPD大鼠血清及肺组织匀浆中NE、α1-AT和NE/α1-AT水平。