多杀菌素（刺糖菌素）基因簇的克隆及基因工程菌的构建

多杀菌素是一种高效的新型绿色广谱生物杀虫剂，是刺糖多孢菌发酵产生的天然抗生素，由六种成分组成，具有活性的是Spinosyn A和Spinosyn D；其特点是使用安全，药效快，无环境污染，并因此获得了美国"总统绿色化学品挑战奖"。美国Waldron等人于2001年对多杀菌素生物合成基因簇的基因分别进行了克隆和序列分析，并通过基因突变方法对不同的基因功能进行了深入的研究，但仍然不能确定控制多杀菌素生物合成的调控基因，原因之一是没有一个完整的基因簇克隆做为遗传操作工具。本项目拟采用最新的细菌人工染色体（BAC）文库克隆技术克隆全长的多杀菌素生物合成基因簇以用于基因表达调控和结构的分析，并与DNA芯片技术相结合，通过分析其生物合成基因簇在细胞中的表达谱，确定其调控基因。同时，还将采用导入含有全长基因簇BAC克隆的方法增加细胞内的基因数目，从而达到提高多杀菌素产量的目。