胰腺星形细胞中的YAP通路对胰腺癌中胰腺星形细胞活化及旁分泌功能的影响及机制探讨

The main function of the Hippo pathway is to negatively regulate the activity of Yes-associated protein (YAP) that is the main downstream mediator of the Hippo pathway.It is not clear about the role of YAP on tumor microenvironment in pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC ). Our previous studies have indicated that activated PSCs induced EMT and chemoresistance of pancreatic cancer cells (PCCs), and highly express AREG, IL-6 and CTGF. To sum up these findings, we speculate that YAP expression is associated with the process of PSCs activation in PDAC. The purpose of our study is to 1) determine the role and mechanism of YAP on PSCs activation by traditional methods of molecular biology in vivo and vitro experiments. 2) further investigate the role of YAP in PSCs on the interaction between activated PSCs and PCCs by co-culture ,which can help us to deeply comprehend the influence of PSCs on PCCs and propose more theoretical foundation for potential therapeutic targets focusing on Hippo-YAP pathway in PDAC.

Yes-associated protein (YAP)是Hippo信号通路中一个起关键作用的下游因子，发挥癌基因的作用。YAP在胰腺癌肿瘤微环境中扮演的角色及其在肿瘤中发挥作用的分子机制尚不明确。我们已证实胰腺癌中活化的胰腺星形细胞（Pancreatic stellate cells, PSCs）介导胰腺癌肿瘤细胞发生化疗耐药及上皮间质转化，而且高表达YAP靶向基因如双调蛋白AREG, 白介素-6等。故本研究拟1）通过传统分子生物学实验方法(如PCR, Western blot及Co-IP)，经体内及体外实验探究YAP对PSCs活化过程的影响及其机制；2）通过芯片检测技术寻找YAP调节的PSCs旁分泌因子，经PSCs与胰腺癌细胞共培养，研究YAP对PSCs旁分泌功能包括对肿瘤细胞功能的影响，为以Hippo-YAP信号通路为靶标的胰腺癌靶向治疗提供理论依据。

背景：胰腺星形细胞（Pancreatic stellate cells，PSCs）在胰腺导管腺癌（ Pancreatic ductal adenocarcinoma，PDAC）中处于激活状态，从而促纤维结缔组织增生。Yes相关蛋白1（Yes-associated protein 1 ，YAP1）可诱导肝脏和乳腺肿瘤中癌症相关成纤维细胞活化，但其对PSCs的影响尚不清楚。在本研究中，我们旨在研究YAP1对PSCs活化和旁分泌的影响和作用机制。.主要研究内容：我们研究了PSCs中YAP1的表达水平，并探讨了YAP1表达的变化对PSCs活化状态的影响。然后我们使用细胞外基质芯片来筛选PSCs中受YAP1表达水平影响而发生变化的基因，并进一步探索了参与调节的转录因子。此外，我们使用共培养系统研究PSCs旁分泌对胰腺癌细胞（pancreatic cancer cells，PCCs）的影响。在PDAC患者中分析IHC表达与临床病理之间的关联。.重要结果：YAP1在PDAC来源的活化PSCs的细胞核中呈高水平表达。 抑制YAP1的表达导致PSCs去活化。YAP1刺激PSCs中富含半胱氨酸酸性分泌蛋白（Acidic and cysteine rich，SPARC）的表达，该调控受到与runt相关的转录因子1（ runt related transcription factor 1，RUNX1）的抑制。来自PSCs的SPARC在PSC-PCC共培养系统中抑制PCCs增殖。 PDAC基质中高水平表达SPARC是PDAC预后不良的独立因素。.关键数据：YAP1的表达水平在ATRA处理组的PSCs胞核中比对照组更低。利用RNAi降低YAP1表达水平或使用YAP1小分子抑制剂处理PSCs导致细胞形态发生改变，α-SMA、Collagen I表达水平明显降低，细胞增殖能力下降，凋亡数量增多，细胞收缩能力下降。YAP1对SPARC的表达和分泌有着显著的正性调控作用，这种作用可被转录因子RUNX1抑制。PDAC间质中高水平表达SPARC与高水平核表达YAP1显著相关（r = 0.433，P <0.001），前者是预后不良的预后因素（P<0.05）。.科学意义：我们的研究揭示了YAP1对PSCs活化和旁分泌调节的关键作用。为通过靶向YAP1从而调控PDAC肿瘤微环境提供了理论依据。