当归酒炙后苯酞类成分变化与抗凝血的相关性研究

The utility theory of Traditional Chinese medicine and the practical experience in clinical practice indicated that Radix Angeilica sinensis processing with wine would promote the blood circulation. The project will carry out the correlation study on composition change of phthalides and anticoagulant activity of wine-baked radix Angelica sinensis by using modern methods and technologies of segregation analysis and bioactivity. Our previous research has found that Angelica sinensis processing with wine would change the phthalides and promote the anti-platelet aggregation activities of phthalides in vitro. Therefore, we put forth a hypothesis that the differences in phthalides were due to the change of the quantity and/or quality of this kind of constituents; The anticoagulant activities were enhanced because phthalides possibly possessed inhibiting platelet aggregation and/or the activities of thrombins and factors. The main research contents of this project include three parts. Firstly, study on the variation of phthalides from the radix Angelica sinensis processed with wine or not; Secondly, anticoagulant activity of phthalides from the radix Angelica sinensis; Thirdly, study on the relationship between the change of phthalides and the anticoagulant activity of wine-baked radix Angelica sinensis based on the mathematical model. These researches will provide a scientific basis for promoting the blood circulation effect of the wine-baked radix Angelica sinensis, and guiding reasonable clinical prescription.

本项目基于对当归酒炙后活血效应增强的药性理论认识和中医临床应用其治疗血瘀血滞的实践经验，应用现代分离分析手段及生物效应评价方法研究当归酒炙前后苯酞类成分变化与抗凝血的相关性。课题组前期研究发现：当归酒炙前后苯酞类成分存在差异，且酒炙后苯酞类组分群体外抗血小板聚集活性显著增强，其中以正丁烯基酜内酯为代表的5个苯酞类化合物亦具有显著的体外抗凝血活性。故提出假设：当归酒炙前后苯酞类成分的差异可能是因为酒炙过程中发生氧化、水解、聚合等反应导致该类成分发生质和/或量的变化；抗凝血活性增强可能是该类成分通过拮抗血小板聚集和/或抑制与凝血相关酶及因子的活性而实现的。研究内容包括：（1）当归酒炙前后苯酞类成分变化规律的研究；（2）当归中苯酞类成分抗凝血作用的研究；（3）基于数学模型的当归酒炙前后苯酞类成分与抗凝血生物效应变化的关联性研究。本研究可为阐明当归酒炙活血增效的科学性及指导临床合理用药提供依据。

当归为中医临床大宗常用中药材，被广泛应用于临床各科，因其尤擅于妇科血虚血瘀证候诸疾的治疗和调养，素有“妇科要药”之称。中医药传统理论认为：当归酒炙后活血通经功效显著增强。然目前酒当归的炮制机理尚不明确。近年来的研究报道发现，除阿魏酸外，当归中的苯酞类成分也是当归活血的主要活性成分。本项目组前期研究发现，当归酒炙前后苯酞类成分存在较大差异，且酒炙后苯酞总提物抑制血小板聚集活性增强。故本项目推测：当归中的苯酞类成分与抗凝血之间有一定的相关性，且当归酒炙前后苯酞类成分在酒炙过程中可能发生质和/或量的变化；抗凝血活性增强可能是该类成分通过拮抗血小板聚集和/或抑制与凝血相关酶的活性而实现的。故本课题开展了以下研究内容：（1）当归酒炙前后苯酞类成分的研究；（2）当归中苯酞类成分抗凝血作用的研究；（3）当归酒炙前后苯酞类成分与抗凝血活性的关联性研究。.本项目采用现代分离方法和技术从当归中共分离得到24个苯酞单体化合物，其中新的苯酞单体6个（包括第一个苯酞三聚体，第一个含有过氧桥的的苯酞二聚体和4个新的苯酞二聚体），4个首次分得的苯酞单体；此外还分得阿魏酸及其酯类化合物6个，含1个新化合物，1个新的天然产物。另外，采用现代色谱分析技术，对酒炙前后当归中苯酞类成分进行了比较性研究，研究结果显示：酒炙前后当归中的主要苯酞类成分发生显著的变化，其中酒炙后Z-藁本内酯含量显著降低，Z-正丁烯夫内酯含量增加，且苯酞二聚体含量增加，结合药理活性研究结果发现：正丁烯夫内酯及部分苯酞二聚体有显著抑制体外血小板聚集和抗凝血活性，提示这可能是酒当归活血增效的炮制机理之一。体外抗ADP诱导的血小板聚集及抗凝血效应评价显示：与空白对照组相比，酒炙前后不同提取方法所得的总苯酞抗凝血及抑制血小板聚集活性存在差异，酒炙后的总苯酞较酒炙前体外抑制血小板聚集活性增强；酒炙后总苯酞较酒炙前能显著延长TT、APTT、PT的凝血时间，不同提取方法所制总苯酞醇提液的效果强于水提液。当归中苯酞单体化合物体外抗凝血实验显示：具有抗凝活性的苯酞单体化合物及阿魏酸及其衍生物均能显著延长TT作用，而对PT无显著活性，说明这些化合物对内源性的凝血途径的作用强于外源性途径，且部分化合物还可作用于纤溶系统，这些可能是其活血的作用的机制之一。本研究为揭示当归酒炙活血增效的炮制机理提供了一定的理论依据，为进一步指导合理临床用药奠定基础。