黄连酒炙后化学成分组合变化与药性改变相关性研究

酒制是中药炮制重要方法之一，可分为酒蒸、酒炙等，"酒制升提"是中药炮制经典理论之一，引药上行是酒炙法主要目的之一。本课题组认为其科学内涵是中药经酒炙后，内在物质发生量变，引起其入血成分变化，导致其体内过程改变（尤其体内组织分布），从而引起人体细胞效应发生改变。为此本项目以酒炙后药性升提的代表性中药黄连为研究对象，结合经典方药黄连解毒汤，采用体液微透析-HPLC /MS联用及实时细胞电子分析技术，研究其生品、酒炙品及分别入方后所制成的标准汤液入血前后、脑脊液、肺部组织间隙液物质成分量变与质变规律以及作用于人支气管上皮细胞等不同部位细胞株的细胞生物学特性规律，构建体液微透析液HPLC指纹图谱与细胞动力学图谱，结合已知小分子化合物图谱库，进行分子识别与匹配，揭示"酒炙治上"的的物质基础及成分组合变化与药性改变的相关性，探讨"酒制升提"炮制机理及"体液药化-细胞效应模式"研究中药炮制机理的新思路。

本基金项目针对黄连酒制前后对其所含化学成分引起的变化开展了研究，结果表明其所含已知生物碱类化学成分炮制前后无明显差异，但是含量上有所变化，未知成分上有一定差异性。对其所含微量元素分析，其所含Fe、Mg、K元素含量差异较大；其挥发性成分经静态顶空-气相色谱-质谱分析其含有42种化学成分，其中16种化学成分为共有成分。对黄连不同炮制品大鼠血浆中相关成分的液相色谱-多级质谱联用分析，有一差异峰，该分子离子峰为L-2-Aminoadipic acid (C6H11NO4)；对小鼠能量代谢因子的影响研究表明，黄连不同炮制品对小鼠不同组织的 酶及 酶的活性产生的影响有差异，同一水提取物给药时间不同对 酶及 酶活性的影响也不相同。与空白对照组 酶活性比较，给药组小鼠心组织活性提高；脑组织、肝组织的活性降低，肺组织的活性影响较小。与空白对照组 酶活性比较，给药组小鼠心、肝组织活性降低；脑、肺组织的活性影响较小。与空白组相比，给药组小鼠脑组织中乙酰胆碱酯酶(Tche)活性均降低；给药时间越长，活性下降越显著。与空白对照组相比，给药对小鼠能量代谢物质丙酮酸、乳酸的含量影响不显著。对大鼠脑内单胺类神经递质分泌的影响研究表明酒炒黄连能促使羟色胺、多巴胺、肾上腺素、乙酰胆碱的分泌。基于不同组织来源的细胞进行不同黄连炮制品的细胞生物学功能筛选，研究表明不同黄连炮制品具有非常明显的组织特异性，如酒炒黄连在胃上皮细胞上体现了与其它炮制品具有明显的差异；酒蒸黄连在免疫系统肥大细胞RBL-2H3、肠上皮细胞HT29和肺上皮细胞A549均体现了与其它黄连炮制品的细胞生物学活性差异。在上述研究成果基础上，项目组认为黄连特有的效应除生物碱类成分以外，尚有一些非生物碱类成分在起作用，为黄连炮制机理的进一步研究提供了思路与基础。