TLR7在同源疫苗抗体选择压下H9N2亚型禽流感病毒抗原变异中的作用

Toll-like receptor 7(TLR7)在识别和清除ssRNA 病毒、介导下游细胞因子产生、连接先天性和获得性免疫反应中有重要作用。TLR7的这种识别使病毒在进化过程中会调整它们的基因组组成以逃避这种识别，因此TLR7介导的同源疫苗抗体选择压下H9N2亚型禽流感病毒的免疫逃逸机制是什么？迄今还未见报道。本研究从目前在我国主要流行基因型的H9N2亚型禽流感病毒的原代病毒Ck/SH/F/98（H9N2）开始，在有和无抗体鸡胚上连续传代获得在同源疫苗抗体选择压下抗原性发生变异的病毒；用反向遗传学技术确定引起抗原变异的相关功能基因；用定量RT-PCR和免疫病理学方法，比较抗原发生和没有发生变异的病毒在有和没有抗体选择压鸡体内的TLR7介导的免疫基因mRNA动态变化、致病性和抗原的分布。分析在同源疫苗抗体选择压下，TLR7介导的宿主免疫反应在H9N2亚型禽流感病毒发生抗原变异中的作用。

已有许多报道推测，疫苗抗体选择压会加速流感病毒的进化。然而没有详细的数据证明有和没有疫苗抗体选择压在流感病毒进化上的差异。在这里，我们使用中国华东地区疫苗株A/Chicken/Shanghai/F/1998 (H9N2) H9N2亚型禽流感病毒在有和没有疫苗抗体鸡胚模型中连续传代80代，分别获得了有疫苗抗体选择压下抗原变异病毒mF47和无疫苗抗体选择压下抗原变异病毒nF52。序列分析显示，疫苗抗体选择压下病毒mF47株有3个基因发生7个氨基酸的替换；但是无疫苗抗体选择压下病毒nF52株有7个基因发生13个氨基酸的替换，其中发生在PB2和HA基因的氨基酸突变相同，并在大多数自然分离株中存在，疫苗抗体选择压下病毒HA基因发生氨基酸替换的代次更早，结果表明有和无疫苗抗体选择压在调控流感病毒基因组变异中有明显的差异；鸡体内的感染实验结果表明，疫苗抗体选择压下流感病毒变异株对鸡呼吸道的复制和感染能力显著强于母本病毒株，而低于无疫苗抗体选择压下流感病毒；mF47株与宿主受体结合力显著高于nF52株，并且前者保留了气溶胶传播能力，后者失去了气溶胶传播能力; 血清学和免疫效率实验发现，有和无疫苗抗体选择压下流感病毒变异株的抗原性都发生了变异，但是疫苗抗体选择压下流感病毒变异株的抗原性变异的更早; 母本病毒不能给抗原变异株提供免疫保护作用，但是抗原变异株能够给母本病毒提供很好的免疫保护作用。我们的研究结果首次证明，疫苗抗体选择压就像一张筛网调控着H9N2亚型禽流感病毒的基因组变异，使流感病毒具备适度提高的感染性，气溶胶传播特性和更快的抗原变异能力，推测这些能力在H9N2亚型禽流感病毒的持续流行和与其他流感病毒重组中起着重要的作用。.本项目已经公开发表标注基金资助的相关中文论文8篇， SCI论文1篇，投稿的SCI论文2篇；培养硕士研究生10名。