从人源抗体库亚克隆可溶性抗肿瘤小分子抗体的研究

用纯化的大肠癌相关抗原（CA-Hb3），从已构建的噬菌体人抗体库中筛选出大肠癌特异的高亲和力的SCFV克隆，其中挑选3个克隆经细胞和组织免疫化学鉴定其特异性与亲本抗体Hb3相似，并列入国际基因库，序号为AFO51165-AF051167。将上述3个克隆质粒载体扩增，酶切，亚克隆入表达载体pET25b（+），经IPTG诱导在宿主菌BL-21（DE3）中表达，分别得到带6聚但氨酸尾的单链抗体，经Western blot鉴定其分子量大小分别为17KD，17KD，7.3KD；同时，用固相金属离子亲和属析方法纯化得到了较纯的ScFv，经ELISA鉴定3个克隆求解分子均具有较好的生物学自学成才性。这为今后进行大肠癌的体内诊断和治疗研究提供了良好的实验材料。