用噬菌抗体库技术制备抗HFRS病毒人单克隆抗体

本项目从肾综合征出血热（HFRS）病人外周血淋巴细胞中提取mRNA，分别扩增出抗体重链可变区（VH）和轻链可变区（VK）基因，序列分析表明其分属于人抗体重链Ⅲ组和人抗体轻链Ⅲ组。在此基础上成功构建了人单链抗体（ScFv）基因库，并从中筛选出HFRS病毒抗原特异性的人抗体基因。以上述筛选出的阳性克隆为模板扩增VH和VK基因，将其分别与抗体真核表达元件连接以后，分别克隆入pSV-gpt和pSV-neo中，构建成功人抗体真核表达载体。将上述人抗体真核表达载体用电穿孔法转染Sp2/0细胞，用RT-PCR检测到抗体基因，用免疫组化法及ELISA检测到抗HFRS病毒特异性的人抗体，从而表明已获得能表达人抗HFRS病毒抗体的细胞株。