长链非编码RNA-NEAT1靶向miR-30a调控幽门螺杆菌感染诱发胃癌的机制及左金丸对其作用的研究

Helicobacter pylori (H.pylori, Hp) infection is one of the most important causes of gastric cancer. Previous data demonstrated miR-30a acts as a tumor suppressor by double-targeting COX-2 and BCL9 in H.pylori-induced gastric cancer, but the underlying regulation mechanism of miR-30a expression remains elusive. Zuo Jin Wan, first prescribed in "Danxi Canon", has been used to treat transitional Chinese medicine defined symptom of "Invasion of the stomach by liver fire", albeit recent studies revealed its broad therapeutic effect on H.pylori associated diseases. Our preliminary results suggested that long non-coding RNA NEAT1 inversely correlated with the expression of miR-30a. Zuo Jin Wan decreased H.pylori-induced gastric cancer in mice and regulated the level of miR-30a and COX-2. Hence we here propose the Zuo Jin Wan inhibits H. pylori-induced gastric cancer via NEAT1/miR-30a signaling pathway..In this proposed research project, we propose to use the CRISPR/cas9 genomicediting technology, to delineate this aforementioned mechanism that NEAT1 regulates H. pylori-induced gastric cancer via miR-30a.We then will investigate if Zuo Jin Wan interfere with this signaling axis of " NEAT1--miR--30a--COX-2/BCL9" to achieve anti-tumor effect. The data from this project will shed light to Hp tumorigenic studies and more importantly, offer proof of concept evidence for the targeting therapeutic use of Zuojin pills in gastric cancer treatment.

幽门螺杆菌（Hp）是胃癌重要的致病因素。前期研究发现miR-30a通过下调COX-2和BCL9从而抑制Hp诱发胃癌，但miR-30a表达的调控机制尚不清楚。左金丸出自《丹溪心法》，主治肝火犯胃证，研究发现左金丸对Hp相关性疾病具有较好的治疗作用，具有广阔的临床应用前景。我们前期研究发现长链非编码RNA NEAT1与miR-30a表达呈负相关；左金丸能够抑制Hp诱发小鼠胃癌，上调miR-30a和下调COX-2表达。因此，我们提出左金丸通过NEAT1/miR-30a通路抑制Hp诱发胃癌的科学假说。.本研究采用CRISPER/cas9基因编辑等技术，研究NEAT1通过miR-30a调控Hp诱发胃癌的机制，以及左金丸对NEAT1-miR-30a-COX-2/BCL9生物信息传递的调节机制。这对于揭示Hp感染诱发胃癌的机理，明确左金丸的作用靶点，进一步扩大中医经典方剂的的临床应用，具有重要意义。

胃癌是临床上常见的恶性肿瘤，幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）感染是胃癌的重要的致病因子。miR-30a是Hp 感染诱发胃癌COX-2 过表达的重要机制，但miR-30a表达的调控机制尚不清楚。我们研究发现长链非编码RNA NEAT1与miR-30a表达呈负相关，且左金丸能够抑制Hp诱发小鼠胃癌，上调miR-30a和下调COX-2表达。本课题采用CRISPER/cas9基因编辑等技术，研究NEAT1通过miR-30a调控Hp诱发胃癌的机制，以及左金丸对NEAT1-miR-30a-COX-2/BCL9生物信息传递的调节机制。.研究发现：① 发现胃癌组织中NEAT1的表达与组织中miRNA miR-30a-3p，miR-30a-5p的表达呈负相关；过表达NEAT1可促进幽门螺杆菌感染的MKN45，SGC-7901细胞的侵袭和迁移，而敲低NEAT1则抑制了幽门螺杆菌感染的MKN45，SGC-7901细胞的侵袭和迁移。② NEAT1与miR-30a的两个亚型miR-30a-3p，miR-30a-5p均存在结合位点，过表达NEAT1时，miR-30a-3p，miR-30a-5p表达量均下调，而敲低NEAT1时，miR-30a-3p，miR-30a-5p表达量均上调。③ miR-30a-3p可以通过调节COX-2表达和β-catenin蛋白的核转运来影响Hp感染的胃癌细胞的生物学行为。miR-30a-5p可以靶向BCL9抑制TCF / LEF的启动子活性和β-catenin下游靶基因的转录活性。④ Hp感染的miR-30a基因敲除小鼠后，胃癌癌前病变和腺癌表现的发生率更高，NEAT1通过靶向miR-30a调节COX-2/BCL-9通路来影响幽门螺菌感染的胃癌细胞的生物学行为。⑤ 左金丸对 Hp 感染人胃癌细胞增殖与转移能力具有明显的抑制作用，左金丸主要是通过阻断NEAT1--miR-30a--COX-2/BCL9 信号轴抑制Hp 感染诱发胃癌的进程。.本课题揭示了长链非编码RNA-NEAT1通过miR-30a激活COX-2/BCL-9信号通路促进Hp感染诱发胃癌的作用机制，明确了左金丸通过NEAT1--miR-30a--COX-2/BCL9 信号轴防治Hp感染诱发胃癌的作用机理。