慢性肾脏疾病状态下1,25(OH)2D3水平降低介导P2Y12受体抑制剂治疗后血小板高反应性的量效关系及机制研究

Some patients with coronary heart disease (CHD) and undergoing percutaneous coronary intervention (PCI) may experience high-residual on treatment platelet reactivity (HRPR) when taking P2Y12 receptor inhibitors, which is associated with a higher risk of adverse events. The rate of HRPR can be significantly increased in patients with chronic kidney disease (CKD). Recent researches showed that the low level of active vitamin D (1,25(OH)2D3) was greatly associated with HRPR when treated with P2Y12 receptor inhibitors. However, the exact mechanism remains unknown. Given that patients with CKD has a lower level of 1,25(OH)2D3, called as vitamin D deficiency, than those with normal kidney function. Therefore, this project is going to study the dose-response relationship between 1,25(OH)2D3 and platelet reactivity after treated with P2Y12 receptor inhibitors in experimental animals and patients. In addition, we will explore the mechanism by which a low level of 1,25(OH)2D3 mediates the HRPR of P2Y12 receptor inhibitors, and guide clinicians to take the optimal antithrombotic therapy with P2Y12 receptor inhibitors for CHD patients with CKD and undergoing PCI.

部分冠心病患者行经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention PCI) 术后服用P2Y12受体抑制剂治疗后出现血小板高反应性，不良事件风险较高，而合并慢性肾脏疾病（CKD）会导致血小板高反应性发生率显著增加。近期研究显示，体内较低的维生素D水平与P2Y12受体抑制剂治疗的血小板高反应性显著相关，但其具体机制尚未阐明。由于CKD患者常伴随体内活性维生素D（1,25(OH)2D3）水平降低，即维生素D缺乏。因此，本项目拟在动物及临床患者中研究1,25(OH)2D3水平与P2Y12受体抑制剂治疗后血小板反应性的量效关系；并利用分子生物学技术以及基因敲除动物模型等手段研究低水平1,25(OH)2D3介导P2Y12受体抑制剂治疗后血小板高反应性的机制，用以指导临床CKD合并冠心病患者，PCI术后P2Y12受体抑制剂的治疗策略。

基于部分冠心病患者行经皮冠脉介入治疗（percutaneous coronary intervention PCI）术后服用双抗治疗及阿司匹林联合一种P2Y12受体拮抗剂后出现了血小板高反应性的机制不明，本课题组前期研究发现合并慢性肾功能不全患者血小板高反应性发生率较高，既往研究认为维生素D缺乏与双抗治疗血小板高反应性的发生有关，且维生素D缺乏是高血压、冠心病、动脉粥样硬化的发生发展的风险因素之一。因此，本项目拟纳入行PCI术的冠心病患者，运用流式细胞术即PLT-VASP方法检测血小板反应指数以反映抗板药物的疗效，采用HPLC-MS/MS检测血浆中25(OH)D3的浓度，ELISA法检测血浆中1,25(OH)2D3的含量，研究发现血浆中1,25(OH)2D3浓度与血小板反应指数呈负相关，且维生素D缺乏是发生血小板高反应性的危险因素。体内实验通过建立维生素D缺乏的动物模型，探究维生素D缺乏时对血小板相关参数表达的影响，与正常组相比，维生素D缺乏组血小板平均体积显著增加，说明血小板活化增强。同时建立了 CKD伴维生素D缺乏的动物模型，探究对血小板活化的影响。研究显示CKD伴维生素D缺乏组老鼠血小板活化标记物CD62P的表达显著增加，且血小板P2Y12蛋白表达显著增加，证实CKD伴维生素D缺乏是发生血小板高反应性的重要原因。体外实验采用人成巨核细胞白血病细胞Meg-01作为血小板的前体细胞，运用VDRshRNA建立VDR敲低的细胞模型用来模拟人体内维生素D缺乏的状态，与对照组相比，VDRshRNA能显著增加ADP诱导的P2Y12的表达P2Y12表达显著增加，可能是通过激活P-STAT3信号通路。本研究综合采用临床、体内和体外实验初步探究了维生素D缺乏引起血小板高反应性发生的具体机制，为后续抗血小板药物的个体化治疗提供理论依据。