利用T细胞受体样抗体研究NK细胞ADCC效应在慢性HBV感染中的作用

Previous studies have shown that antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) mediated by natural killer (NK) cells plays an important role in the control of virus infection and cancer immunotherapy. However, the role of ADCC in HBV infection remains unclear. Newly generated T-cell receptor-like antibody (TCRL-Ab) can authentically mimic TCR specificity and recognize peptide/major histocompatibility complex (pMHC) complexes present on the surface of HBV infected hepatocytes. Our preliminary work have found that such TCRL-Ab can mediate ADCC activity of NK cells and the density of CD16 on NK cells was significantly reduced in patients with chronic HBV infection, which resulted in impaired capacity of ADCC. Hence, we speculated that TCRL-Ab mediated ADCC of NK cells may contribute to effective control of HBV replication, and restoration of CD16 expression on NK cells from patients with chronic HBV infection may enhance ADCC activity, thus improve the antiviral ability of NK cells. By virtue of such TCRL-Ab, current research aims to investigate the characteristic of ADCC mediated by NK cells in chronic HBV infection and to analyze potential factors that exert influence on ADCC capacity. In addition, the effect of restoration of CD16 expression on NK cells from patients with chronic HBV infection on ADCC capacity in suppressing HBV replication will be explored in mouse model and in vitro experiments. This study will not only help to clarify the function of ADCC mediated by NK cells in chronic HBV infection, but also provide theoretical evidence for the rational development of new immunotherapeutic strategy for the management of chronic HBV infection.

研究证实NK细胞通过CD16介导的ADCC在控制病毒感染和肿瘤免疫治疗中发挥着重要作用，但其在HBV感染中的作用至今尚未阐明。T细胞受体样抗体（TCRL-Ab）能高度模拟TCR，特异性识别HBV感染肝细胞表面抗原肽-MHC复合物。我们前期研究发现TCRL-Ab可介导NK细胞ADCC，且慢性HBV感染者NK细胞CD16表达下降从而导致其ADCC效能降低。我们推测TCRL-Ab介导NK细胞的ADCC能有效控制病毒，通过恢复NK细胞CD16表达可增强其ADCC效应以提高抗病毒能力。本课题拟借助TCRL-Ab研究NK细胞ADCC在慢性HBV感染中的作用以及其与疾病预后的关系，分析影响此效应的因素，并通过体外实验和动物模型探讨恢复慢性HBV感染者NK细胞CD16表达是否能增强ADCC在病毒控制中的作用。本研究有助于阐明NK细胞ADCC在慢性HBV感染中的作用并为探索乙肝免疫治疗新策略提供理论依据。

NK细胞作为天然免疫应答的主要承担者，除了通过分泌IFN-γ和TNF-α等细胞因子发挥抗病毒效应，NK细胞也可通过细胞表面活化性受体识别被病毒感染的细胞，利用细胞毒作用直接杀伤靶细胞，其中由CD16介导的抗体依赖细胞介导细胞毒性作用（ADCC）已被证实在控制病毒感染和肿瘤免疫治疗中发挥着重要作用，但其在HBV感染中的作用至今尚未阐明。T细胞受体样抗体（TCRL-Ab）能高度模拟TCR，特异性识别HBV感染肝细胞表面抗原肽-MHC复合物, 因此本研究拟借助TCRL-Ab研究NK细胞ADCC效应在慢性HBV感染中的作用。我们通过不同阶段的慢性HBV感染患者和抗病毒治疗的纵向队列分析发现慢性HBV感染者外周血NK细胞抑制性受体和激活性受体表达水平失衡，其NK细胞ADCC效应显著低于健康志愿者。值得注意的是，Peg-IFNα-2a抗病毒治疗后，慢乙肝患者NK细胞ADCC效应不但没有恢复，反而进一步降低。进一步分析发现TCRL-Ab介导NK细胞的ADCC效应主要集中于NKdim细胞亚群，与其表达CD16（IgG Fc的受体）强度以及靶细胞表面MHC复合物表达水平有关；体内和体外实验均表明干扰素α可下调NK细胞CD16表达水平。另外，NK细胞ADCC对靶细胞的效应以产生抗病毒细胞因子IFN-γ为主；通过人CD16重组慢病毒转染慢性HBV感染患者NK细胞有可能提高NK细胞的CD16表达水平，有望提高其ADCC效应进而有利于病毒控制。总而言之，本项目利用TCRL-Ab证明了NK细胞ADCC效应在乙肝病毒控制中的作用，为基于NK细胞的乙肝免疫治疗新策略提供了理论依据，具有较好的临床意义和应用前景。