NK细胞活化性受体NKP46在慢性HBV感染中的作用及其机制研究

The mechanisms of chronity and individual response to treatment in HBV infection are not fully clear and still be the hot and difficult concerns.HBV infection has the characteristics of complex spectrum and the heterogeneity of immune response. Recent studies have shown that innate immunity, especially NK cells, not only play an key role in host defense against HBV infection,but also suppress HBV replication.The function of NK cells depends on the the balance of inhibitory and activating receptors. Preliminary studies found that activatory receptor NKP46 had differences between the different groups,NKP46 had negative correlation with the level of HBV DNA and ALT and NKP46 as the major NK cell lysis receptors was directly related to the killing by the analysis of NK cell phenotype, receptors and function in different immune stages of chronic HBV infection.On the basis of preliminary studies, we aim to analyze the signaling pathway gene expression of NKP46 in chronic HBV infection,the intrahepatic expression of NKP46 in chronic HBV infection patients and test the antiviral effect by blocking the NKP46 in vivo. This has the significance to understand the mechanisms of chronic HBV infection find the therapeutic target.

乙型肝炎慢性化及治疗应答个体化的机制未完全明确，仍为研究的热点和难点。HBV感染后疾病谱复杂且免疫应答存在异质性。近期研究表明天然免疫特别是NK细胞不仅在宿主防御HBV感染的过程中起着重要作用，并且可以抑制HBV复制。我们前期通过分析慢性HBV感染的不同免疫阶段NK细胞表型、受体及功能是否存在差别，发现活化性受体NKP46在不同组间存在差别，NKP46与HBV DNA、ALT负相关，并且确定了NKP46作为NK细胞的主要杀伤裂解受体，与杀伤功能直接相关。拟在前期研究基础上，采用CBA Flex法分析慢性HBV感染者NKP46信号途径基因表达是否异常并且应用核苷类似物抗病毒治疗后对信号途径基因表达是否有影响，利用流式细胞术检测慢性HBV感染者肝脏内NKP46表达以及通过动物实验体内阻断NKP46观察其抗病毒效应。从天然免疫角度阐明HBV感染慢性化机制，为需找HBV持续感染治疗靶点奠定基础。

慢性乙型肝炎是一个全世界范围的健康问题，其慢性化以及治疗应答个体化的机制未完全明确，仍为研究的热点及难点。HBV感染后疾病谱复杂且免疫应答存在异质性。天然免疫的效应细胞如NK细胞为病毒感染的第一道防线。许多发现促使我们针对乙型肝炎的NK细胞进行研究。首先，肝脏内淋巴细胞30-50%为NK细胞；其次，慢性乙型肝炎抗病毒药Peg干扰素α，为NK细胞有效的激活剂。研究表明NK细胞参与HBV感染后的免疫应答，HBV逃逸NK细胞的清除作用与病毒持续性感染密切相关。NK 细胞的功能受抑制性受体和活化性受体之间的动态平衡所调节。我们前期通过分析慢性HBV感染的不同免疫阶段NK细胞表型、活化性和抑制性受体以及功能是否存在差别，发现活化性受体NKP46在不同组间存在差别，NKP46与HBV DNA、ALT负相关，并且确定了NKP46作为NK细胞的主要杀伤裂解受体，与杀伤功能直接相关。在前期体外通过外周血研究结果基础上，通过肝组织与外周血结合，体内与体外结合进一步针对NKP46在慢性HBV感染进行深入研究：1、体外：（1）NKP46信号途径分析：应用Illumina Human WG-6 v3.0(Illumina,San Diego, CA, USA)全基因组表达芯片分析慢性HBV感染者NKP46信号途径基因表达，包括NK细胞信号通路、ERK/MARP信号通路以及钙离子信号通路，结果发现不同分组之间基因表达没有差别；（2）肝组织中NKP46的表达：应用免疫组化检测慢性HBV感染者肝组织NKP46表达，结果发现慢性HBV感染者NKP46表达比正常对照组升高。2、体内：为了证明阻断NKP46后的体内抗病毒效应，我们通过高压注射HBV质粒pAAV/HBV1.2建立HBV感染小鼠模型，分别用抗NKP46抗体和同型抗体IgG进行阻断，结果发现阻断NKP46后HBV感染小鼠血清中HBV DNA下降减少，并且进一步应用免疫组化检测小鼠肝组织HBcAg的表达，结果发现阻断NKP46后HBcAg表达增高，这些结果表明体内阻断NKP46的识别导致NK细胞清除病毒的能力减弱。本研究可为进一步阐明HBV感染的慢性化机制提供理论依据；可能改进HBV抗病毒治疗策略，如NKP46作为抗病毒治疗的靶点，进而调整治疗方案；为抗NKP46在未来是否可拟补干扰素及核苷类似物的不足提供实验室数据。