白藜芦醇对缺血性脑损伤保护作用及干细胞修复的影响机制研究

干细胞对于缺血性脑卒中的治疗具有很好的应用前景，但在处理中应尽可能减少影响干细胞存活的不利因素。研究发现，缺血预处理（IPC）能调动机体和细胞内源性机制，通过多种相互协调的分子途径增强对缺血性脑卒中损伤因素的耐受性。白藜芦醇系一种调节细胞因子的单体药物，我们的前期研究发现它具有抗氧化、抗癌和促进血管生成等生物活性，并且白藜芦醇预处理（RPC）能通过SIRT1-UCP2通路产生类似IPC的作用而发挥神经保护功效。本研究拟在此基础上，从RPC着手，以SIRT1-UCP2通路为基点，于体外和体内实验两个层面采用神经功能学、电生理学、病理学、分子生物学及电镜等方法，探讨IPC和RPC对脑组织缺血损伤的保护作用及干细胞存活、增殖、分化和神经修复等方面的影响，并深入研究RPC与IPC之间的关系，旨在阐明白藜芦醇促进缺血性脑损伤后神经修复的位点，为干细胞治疗缺血性脑损伤提供新的策略。

采取干细胞干预对于缺血性脑血管疾病具有很好的应用前景，但实际应用过程中仍存在较多的困难性。本课题对缺血性微环境和神经再生两者关系的研究为切入点，以大鼠脑缺血模型和原代神经干细胞作为探索对象，旨在进一步阐明白藜芦醇（Resveratrol ，Res）预处理对脑缺血性损伤和内、外源性神经干细胞的保护作用及机制，为Res在脑缺血性疾病相关干细胞移植治疗中的临床应用奠定理论基础。本课题以氧糖剥夺模型为基础，探讨了Res预处理对神经干细胞存活性的影响；建立了大鼠大脑中动脉栓塞模型，研究了Res预处理对大鼠脑缺血损伤的保护作用，并且从分子水平探寻了Res对缺血性脑损伤和神经干细胞保护作用的相关机制。经细胞学研究表明，白藜芦醇预处理能提高氧糖剥夺模型中大鼠神经干细胞的存活能力，并降低细胞凋亡的发生；分子生物学实验结果显示，Res预处理可上调氧糖剥夺条件下神经干细胞中SIRT1的表达，同时抑制了UCP2的高表达；使用SIRT1通路的抑制剂能够部分地抑制Res预处理的干细胞保护作用，研究提示：SIRT1-UCP2通路在Res预处理相关的神经干细胞保护作用中发挥了重要作用。动物实验研究证明，Res预处理能降低大鼠脑缺血模型后的缺血灶梗死面积，并能改善建模大鼠的神经功能和学习与记忆能力。分子生物学实验亦证实：Res预处理的脑缺血保护作用也可能与SIRT1表达的上调、以及抑制UCP2的高表达有关。免疫荧光染色结果还证明了Res能提高大鼠脑缺血模型中内源性神经干细胞的增殖与分化作用。. 综上所述，白藜芦醇预处理能够对大鼠脑缺血模型发挥保护作用，且这一保护作用与SIRT1-UCP2通路及内源性干细胞的增殖与分化相关；干细胞移植实验结果证实，Res预处理后对于外源性神经干细胞在缺血损伤区域的移植存活率影响较小，这说明，单独使用Res预处理并不能完全改善干细胞移植的治疗效用，未来对于联合干预方式的探索很可能成为改善干细胞移植疗效的一个不可缺少的环节。