肿瘤耐药相关基因3'UTR内SNP与结直肠癌药物敏感关联性及耐药机制

在前期生物信息学分析的基础上，本项目拟采用限制性片段长度多态性（RFLP）及实时荧光定量PCR（QPCR）等方法检测肿瘤耐药相关基因3'UTR内16个SNP位点基因型，研究这些SNP基因型与以铂类药物为基础化疗方案的结直肠癌患者药物敏感关联性，筛查结直肠癌药物敏感相关性SNP。培养结肠癌Lovo细胞株，稳定转染SNP野生型及突变型等位基因pcDNA3.1表达载体，miRNA mimics及inhibitor转染以上各株细胞，不同浓度顺铂处理各株细胞，QPCR及Western blot检测细胞miRNA靶基因mRNA和蛋白表达水平，WST检测细胞增殖活性，研究SNP对miRNA表达调控功能的影响，探讨结肠癌细胞耐药机制。本项目研究所得结果和结论不仅对阐明结直肠癌耐药机理有重要理论意义，并且筛选到的遗传标记有望作为指导临床结直肠癌个体化治疗的遗传标记，具有重要的社会价值和临床应用意义。

该课题采用多重聚合酶链（multiplex ligation detection reaction ，iMLDR)反应技术研究了K-ras、MRP、HIF-1α、XRCC1、ERCC1、MMP-9等基因30多个SNP位点多态性在结直肠癌和健康人群中的基因型分布。研究基因多态性与结直肠癌发病相关性及可能的机制，并重点研究了基因3'-UTR SNP与结直肠癌相关性及患者生存时间及化疗药物疗效。..研究发现MMP-9 基因多态性与结直肠癌发病有关，该研究结果发表在SCI收录杂志《Mol Biol Rep》中。..通过研究还发现XRCC1 Arg194Trp多态性Trp/Trp 基因型与ERCC1 rs2336219 AA基因型能显著提高人群患结直肠癌的风险，并且携带XRCC1Arg194Trp多态性 Trp等位基因和 ERCC1 3‘UTR rs735482 多态性CC基因型的结直肠癌患者对以奥沙利铂为基础的化疗药物耐受，更易复发和转移，生存时间缩短。机制研究发现这可能与基因多态性调节了蛋白表达水平有关。该研究结果即将发表在SCI收录杂志《Mutagenesis》上（已接收，IF3.5）。..该研究还发现k-ras 3‘UTR 基因多态性rs61764370 和rs712 与结直肠癌预后和奥沙利铂为基础的化疗药物耐受有关，研究结果已形成文章，投稿过程中。..其余研究成果已发表SCI论文两篇，培养硕士研究生5名，培养青年医师3名。