增生性玻璃体视网膜病变血清分子标志物的验证

增生性玻璃体视网膜病变（proliferative vitreoretinopathy,PVR）是导致视网膜脱离手术失败的主要原因。PVR发生发展机理复杂，临床上缺少客观的评价指标。玻璃体的蛋白质异常表达贯穿在整个PVR病程。以往研究由于技术的限制，不能全面地了解PVR的玻璃体蛋白质变化。本课题组前期研究，应用二维液相色谱联合质谱分析，鉴定出PVR的玻璃体特异蛋白质，筛选出在PVR患者的玻璃体和血清中同步出现、并与PVR严重程度相关的候选分子标志物。本研究将分别从临床血清样本、PVR动物模型和视网膜色素上皮细胞分子水平三个方面对候选分子标志物在临床上评价PVR严重程度的敏感性和特异性、对PVR发生过程的贡献以及由何种细胞分泌等问题进行分析判断。本研究的完成将对PVR的分级有一个全新的量化的概念，对PVR的治疗方式选择和预后评价有积极作用，并为临床上PVR的药物干预开辟了一条新路。

增生性玻璃体视网膜病变（proliferative vitreoretinopathy，PVR）是导致视网膜脱离手术失败的主要原因。PVR发病机理复杂，临床上缺少客观的评价指标。玻璃体的蛋白质异常表达贯穿在整个PVR病程。本课题组通过二维液相色谱联合质谱分析，鉴定出PVR的玻璃体特异蛋白质，筛选出在PVR患者的玻璃体和血清中同步出现、并与PVR严重程度相关的候选分子标志物：激肽原1 和胰岛素样生长因子结合蛋白6（IGFBP-6）。本研究对这2个候选的分子标注物进行了临床血清样本的验证，结果证实这两个蛋白质的血清浓度与PVR的严重程度成正相关，ROC曲线分析显示当激肽原1高于441.75 ng/ml, IGFBP-6高于181.4pg/ml可以预测为严重PVR；当激肽原1高于88.5 pg/ml和IGFBP-6高于98.5pg/ml可以预测为预后较差。我们又对2个蛋白质参与PVR的贡献进行了研究。采用大鼠玻璃体腔内注入RPE细胞悬液4 μL(2.5×108 /ml)和富含血小板的血浆6 μL(2.5×108 /ml)建立大鼠PVR模型，建模成功率为89.3%。Western blot分析显示激肽原1 和IGFBP-6在PVR组中的表达明显高于对照组（P<0.05）。ELISA结果显示，IGFBP-6在PVR大鼠血清、玻璃体、视网膜的平均浓度高于对照组。Real-Time PCR法检测PVR大鼠的视网膜组织中IGFBP-6mRNA的表达量下降，肝脏中表达不增加。IGFBP-6对ARPE-19细胞的体外研究显示，IGF-Ⅱ可以促进ARPE-19细胞增殖，IGFBP-6干预后，可以抑制IGF-Ⅱ可以促进ARPE-19细胞增殖，而对VEGF、PDGF、TGF-β诱导的ARPE-19细胞增殖没有明显的抑制作用。采用细胞划痕实验法检测对细胞迁移的影响，结果显示IGF-Ⅱ可以促进RPE细胞移行，IGFBP-6干预后，可以抑制 IGF-Ⅱ诱导的RPE细胞的迁移。本研究的完成对PVR的分级有一个全新的量化的概念，对PVR的治疗方式选择和预后评价有积极作用，并为临床上PVR的药物干预提供了新的靶点。