石榴皮多酚促进慢性皮肤溃疡愈合作用及机制研究

本研究立足于新疆石榴的资源优势，结合石榴皮的药用价值和前期工作基础，拟在分子水平上研究石榴皮多酚促进慢性皮肤溃疡愈合的物质基础及其作用机制。本项目拟采用大孔树脂、Sephadex LH-20等现代色谱技术对新疆石榴皮多酚的有效成分进行分离纯化，并通过MS、NMR等波谱技术鉴定结构，同时利用HPLC等技术进行石榴皮多酚的质量研究。并以糖尿病大鼠慢性皮肤溃疡为模型，实验采用生化、组织学、ELISA、RT-PCR等分子生物学技术从分子水平进行石榴皮多酚对慢性皮肤溃疡促愈合作用及机制研究，重点探讨石榴皮多酚对伤口组织成纤维细胞的行为和促愈合因子NO、iNOS、FGF和TGF-β1水平以及相关因子的mRNA水平的影响。最终阐明石榴皮多酚对慢性皮肤溃疡促愈合作用的机制及物质基础，为进一步揭示石榴皮治疗皮肤溃疡和创伤的原因提供科学依据，为开发新疆石榴的药用价值做出积极贡献。

通过实验筛选出石榴皮多酚的提取工艺，并对其化学成分进行研究分析，测定了石榴皮各极性部位及十二个不同产地石榴皮总多酚含量，优选出总多酚含量高的石榴皮药材制备石榴皮多酚凝胶，建立其质量控制方法并考察其经皮渗透性。然后以Wistar大鼠为研究对象，分别建立Ⅰ型和Ⅱ型糖尿病慢性皮肤创伤模型，按血糖值、性别均分为6组，石榴皮多酚高（30%）、中（20%）、低剂量组（10%）、阳性对照组（重组人表皮细胞生长因子，rhEGF）、基质组及空白对照组。测定涂药后不同时间点各组大鼠皮肤创伤愈合百分率，进行组织学检查（HE染色、电镜TEM、免疫组化等），用ELISA试剂盒分别测定血清及创面组织中各种细胞因子（NO、iNOS、Hyp、ColⅠ、Col Ⅲ、TGF-β1、VEGF、FGF、EGF 及PDGF）的表达水平，并从分子生物学方面考察创面组织中细胞因子在mRNA水平的基因表达。结果显示：石榴皮多酚凝胶能够显著促进两种类型糖尿病大鼠慢性皮肤创伤的愈合。