mRNA中N6-甲基腺苷的系统分析及其生物功能研究

N6-methyladenosine (m6A) is the most important internal mRNA modification found in eukaryotic organisms, and it has very important biological function in the process of life. Lack of high resolution analytical methods for m6A detection seriously hinders the process for the studies of m6A biological functions and the mechanism of action. In this project, we want to study and establish a high resolution, and high throughput mapping method for m6A based on specificity of Reverse transcriptase and new Sequencing technology. We also plan to develop a highly sensitive method for m6A quantitation based on specificity of Reverse transcriptase enzyme, the accuracy of the ligase and PCR amplification technology. With this project, we can use these methods to analyse m6A distribution and content, and study on its biological function and mechanism. Furthermore, we will apply these methods in m6A detection of mRNA in various cancer cells and the corresponding normal cells, and elucidate the difference of m6A mapping and content. The biological functions of m6A in cancer generation and development and the diagnosis of cancers by using m6A as new biomarkers will also be investigated in this project.

N6-甲基腺苷（m6A）是真核生物体内mRNA上很重要的一种后修饰碱基，在生命过程中具有非常重要的生物功能，但由于缺乏精确定位m6A在mRNA上分布位点的分析技术，从而阻碍了对其生物功能及作用机制的研究进展。本项目拟基于反转录酶的特异性和新一代测序技术，研究建立可以准确测定m6A修饰位点的高通量测序技术；并基于反转录酶特异性、连接酶的准确性和PCR扩增技术，研究建立准确定量特定mRNA某一位点A和m6A比例的方法。利用以上方法准确分析mRNA上m6A的位点分布及含量，进一步研究其生物功能及作用机制。计划将所建立的分析方法应用于各种癌症细胞系及其相对应的正常细胞系mRNA中m6A分析检测，阐明二者含量及m6A分布图谱的差别。探讨关键位点m6A 在癌症发生过程中的作用，通过检测关键位点的m6A，研究以m6A 作为新的基因标志物，用于癌症的诊断分析。

N6-甲基腺苷（m6A）是真核生物体内mRNA上很重要的一种后修饰碱基，在生命过程中具有非常重要的生物功能，但由于缺乏精确定位m6A在mRNA上分布位点的分析技术，从而阻碍了对其生物功能及作用机制的研究进展。本项目基于特异性的连接酶或选择性延伸酶和扩增反应建立了三种可以准确定位m6A的高灵敏度的定量分析方法。这些方法快速、简单，并且能准确定量特定位点的m6A，方法灵敏度高，可以用来检测表达含量少的mRNA和lncRNA中m6A的含量。这些方法方法将对m6A生物功能及作用机制的研究具有重要的作用和意义。