一个新克隆的microRNA调控血管平滑肌细胞凋亡参与终末期肾病动脉钙化发病机制的研究

血管平滑肌细胞（VSMCs）凋亡在动脉钙化中起关键作用，而动脉钙化相关性心血管疾病是终末期肾病（ESRD）最常见并发症和首要死因之一。在前期研究中，我们自主新克隆了一个microRNA（暂称miR-X），发现其在VSMCs凋亡过程中表达下调，通过生物信息学方法预测其靶基因可能是参与细胞凋亡调控的Gas6，并通过体外实验证实抑制miR-X表达能上调Gas6。本课题将进一步通过体外细胞实验探讨低表达和过表达miR-X对VSMCs凋亡的影响。然后通过动物体内实验，使用miR-X抑制剂导致体内miR-X缺失，观察高磷酸盐饮食加肾切除诱导ESRD动脉钙化小鼠模型中VSMCs调亡及动脉钙化的发生。并采用荧光报告基因策略等方法验证miR-X的靶基因，阐明miR-X作用机制。本研究从分子、细胞和动物实验水平，探讨miR-X对VSMCs调亡的调控机制，为ESRD动脉钙化的防治提供新的理论基础和防治策略。

本研究着重探讨新发现的miRNA (暂命名为miR-X)调控无机磷酸盐诱导的血管平滑肌细胞（VSMCs）凋亡的作用及其相关机制。我们采用Real-time PCR证实miR-X在VSMCs凋亡过程中表达逐渐降低，进一步通过loss-of-function和gain-of-function方法观察到其对ALP、OC及Gas6表达的影响，结果显示采用miR-X mimics过表达miR-X可降低Gas6蛋白表达，抑制VSMCs凋亡，而采用miR-X inhibitor则促进Gas6蛋白表达，促进VSMCs的凋亡。通过荧光素酶报告基因系统证实Gas6是miR-X的靶基因。本研究证实miR-X可抑制血管平滑肌细胞的凋亡，进一步抑制动脉钙化的形成，为动脉钙化的发病机制及防治提供了新的靶点和理论依据。