放射性肝损伤血清肽组学研究

放射性肝病（RILD）是继发于肝癌放射治疗最严重的、制约肝癌放疗的剂量依赖性并发症，目前对RILD仍缺乏有效的预测和治疗方法，一旦发生严重RILD大部分患者发生肝衰竭死亡，RILD已成为制约肝癌放疗的一大瓶颈。放射损伤后出现"细胞因子爆发（Cytoking Storm）"，血清中存在的丰富的多肽片段为早期预测和诊断放射性损伤提供了丰富的标志物资源，为应用蛋白质组学筛选放射性损伤的生物标志提供可能。本课题拟通过蛋白组学技术检测放疗后发生RILD患者在放疗不同时间点血清多肽，筛选RILD早期特异性血清多肽谱，建立模型，早期预测和评估放射性肝损伤,放疗过程中及时剂量控制和干预,减少致死性并发症的发生。通过分析血清多肽谱中与照射体积、剂量学参数密切相关的特定分子量的蛋白多肽并进行鉴定，进一步寻找与肝脏放射损伤相关的分子标志物。

放射治疗是肝癌及肝脏邻近脏器恶性肿瘤有效治疗方法，放射性肝病（RILD）是继发于肝癌放射治疗最严重的、制约肝癌放疗的剂量依赖性并发症，目前对RILD仍缺乏有效的预测和治疗方法，一旦发生严重RILD大部分患者发生肝衰竭死亡，RILD已成为制约肝癌放疗的一大瓶颈。放射损伤后出现血清中存在的丰富的多肽片段为早期预测和诊断放射性损伤提供了丰富的标志物资源，为应用蛋白质组学筛选放射性损伤的生物标志提供可能。我们顺利完成放射性肝损伤患者放射治疗资料和标本收集, 作为密切结合临床的研究，严格按照标书入组条件及中山医院伦理委员会批复，建立了原发性肝癌及转移性肝癌放射治疗血清数据库。通过血清蛋白组学基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI－TOF－MS）获得了RILD患者早期特征性血清多肽谱，筛选出在 4646Da， 3242.7 Da， 2880.4 Da，2683.8 Da，2661.3 Da，1937.1 Da，1849 Da，1618.4 Da，1608.2 Da 处蛋白多肽丰度（相对离子强度）在放疗40Gy后有显著升高（P<0.05），在3885.3 Da，2954.1 Da分子量的多肽放疗40Gy后有显著下降（P<0.05）。建立神经网络模型能有效在实验组中识别RILD, 进一步通过更多的临床数据完善，这一模型具有早期预测RILD临床应用价值；去除高丰度蛋白后，通过血清二维凝胶电泳筛选出56个显著差异蛋白点,并对这些蛋白点进行质谱蛋白鉴定； RILD相关细胞因子与肝微环境中放射诱导肝非实质细胞损伤和病毒性肝炎活化相关，动物实验和体外研究肝内非实质细胞放疗后释放TNFa，IL-1β，IL-6参与RILD的发生和发展, 放疗前抑制肝内枯痞细胞，可以抑制TNFa，IL-1β，IL-6，显著缓解放射诱导的肝细胞凋亡。这些研究为早期诊断和治疗RILD开辟了新的途径。